Методика приготовления препаратов СМЖ для микроскопиче ского исследования

Способы:
Исследование содержимого фибриновой пленки
Исследование окрашенного препарата в счетной камере

Исследование в счетной камере
Подсчет количества форменных элементов ликвора
Дифференциация клеточных элементов

Принцип исследования
Исследование проводят с помощью реактива Самсона.
Реактив Самсона: кислота уксусная 5,3 моль/л; фенол 0,22 моль/л; фуксин основной 2 г/л; спирт этиловый 18 г/л
Уксусная кислота, которая содержится в реактиве, растворяет эритроциты, фуксин окрашивает ядра клеток в интенсивный красный цвет, что облегчает подсчет клеток и их дифференцирование.

Проведение анализа
Спинномозговую жидкость перемешать вращением пробирки между ладонями в течение 2–3 минут, затем смешать с реактивом Самсона в смесителе для лейкоцитов.
Реактив набрать до первой метки смесителя, до второй набрать спинномозговую жидкость.
Встряхнуть смеситель и оставить на 10–15 минут для прокрашивания клеточных элементов.
Набрать смесь пипеткой и перенести в заранее подготовленную камеру Фукса–Розенталя (в случае отсутствия последней допускается использование камеры Горяева).
Посчитать лейкоциты на всей площади сетки камеры при малом увеличении микроскопа (окуляр 15, объектив 8).
Для дифференциации клеток использовать окуляр 7, объектив 40.

Формулы
Количество клеток в 1 мкл ликвора (Х) (при использовании камеры Фукса–Розенталя):
Х = (А*11) / (3,2*10)
где А – количество клеток во всей камере; 3,2 – объем камеры, мкл, 11/10 – степень разведения СМЖ реактивом Самсона.
При использовании камеры Горяева:
Х = (А*11) / (0,9*10)
0,9 – объем камеры
Рекомендуется посчитать не менее трех камер Горяева, взяв затем среднее арифметическое значение.

Нормальные показатели
Цитоз (нормальное содержание лейкоцитов) в люмбальном ликворе:
у взрослых – 0–5*10^6 /л;
у новорожденных – 20–25*10^6 /л;
у детей до года – 14–20*10^6 /л;
у детей старше 10 лет – 2–6*10^6 /л. Преобладают лимфоциты.

Исследование содержимого фибринозной (фибриновой) пленки
Принцип исследования:
Ликвор, содержащий большое количество грубодисперсных белков, сразу после выпускания сворачивается в виде желеобразного сгустка, внутри которого могут содержаться микобактерии туберкулеза (МБТ). Исследование содержимого сгустка на МБТ проводят с помощью микроскопа.
Реактивы – карболовый фуксин по Цилю–Нильсену; – 25 % серная кислота; – 1 % раствор метиленового синего.

Проведение анализа
Фибринозная пленка может образоваться сразу после получения спинномозговой жидкости или через некоторое время (в течение 30 мин, 1 ч, 10–15 ч и более). Для обнаружения фибринозной пленки ликвор оставить в пробирке до образования «мешочка».
Из сформированного фибринового «мешочка» мягкой пастеровской пипеткой извлечь каплю спинномозговой жидкости с клетками, нанести на предметное стекло, окрасить по методу Циля-Нильсена , накрыть покровным стеклом
Микроскопировать с масляной иммерсией в световом микроскопе (окуляр 10, увеличение 100).