Микробиологическая диагностика дифтерии

Эпидемиология
Источники инфекции – больной человек или носитель токсигенных штаммов дифтерийных бактерий. Больной дифтерией может быть заразным в последний день инкубационного периода и в период разгара болезни. Путь передачи – воздушно-капельный. В связи с длительным сохранением жизнеспособности микроорганизмов на предметах обихода возможна передача инфекции через эти предметы контактно-бытовым путем. Иммунитет после дифтерийной инфекции нестойкий.

Патогенез
Проникнув в организм, возбудитель останавливается в области входных ворот (в глотке, носу, гортани, на слизистых оболочках глаз, половых органов и т. д.). Там он размножается и продуцирует экзотоксин, под действием которого происходят коагуляционный некроз эпителия, расширение сосудов и повышение их проницаемости, выпотевание экссудата фибриногеном и развитие фибринозного воспаления. Продуцируемый возбудителем токсин всасывается в кровь и вызывает общую интоксикацию с поражением миокарда, периферической и вегетативной нервной системы, почек, надпочечников.

Материал для исследования
Мазки со слизистой оболочки зева и носа, пленки с поверхности миндалин и носоглотки.

Бактериоскопическое исследование
Мазки окрашивают по методу Грама, метиленовым синим по Леффлеру, по Нейссеру.
Окраска по Граму
Окраска по Леффлеру
Окраска по Нейссеру
Практически не используют в связи с его низкой надежностью

Бактериологическое исследование
Среда Клауберга (питательный агар с теллуритом натрия, глицерином и дефибринированной кровью)
Биовар gravis
Биовар mitis
Является ведущим методом диагностики дифтерии.
Напоминают цветок маргаритки

Проба Пизу
C.diphtheriae вызывают почернение среды (в результате образования сульфида свинца), вокруг которого появляется зона коричневого цвета, а на глубине 1 см от поверхности агара в среде образуется коричневое "облачко".
Для определения цистиназы

Определение токсигенности
В чашку Петри с питательным агаром, содержащим 15-20 % лошадиной сыворотки, 0,3 % мальтозы и 0,03 % цистина, кладут полоску фильтровальной бумаги, пропитанную антитоксической противодифтерийной сывороткой, содержащей 5000 АЕ/мл.
Образование преципитата в виде белых линий - "усов".

Молекулярно-биологические методы
ПЦР - диагностика

Иммунохимические исследования
(Иммуноферментный анализ)
Для проведения иммуноферментного анализа на предварительном этапе производят связывание соответствующего антигена с поверхностью лунки полистиролового планшета или пробирки. Экзотоксины, в частности — дифтерийный токсин (или анатоксин), содержат в своих молекулах высоко липофильный компонент и поэтому хорошо связываются с поверхностью полистирола.
ИФА