Прогностическая значимость маркера TMPRSS2-ERG для диагностики рака предстательной железы.

Викторов Д.А., к.б.н., Тороповский А. Н., к.м.н., Никитин А. Г., к.б.н., Садртдинова Г. Р., к.б.н.
ООО «ТестГен», г. Ульяновск.

432072, г. Ульяновск, 44й Инженерный проезд, д. 9, ООО «ТестГен»,
Викторов Д.А., заведующий лабораторией НТР, к.б.н., viktorov@testgen.ru.

Контакты

Исследование экспрессии химерного гена TMPRSS2-ERG в моче пациентов с подозрением на рак предстательной железы и определение диагностических показателей данного молекулярно-генетического маркера путём сравнения с заключением гистологических исследований.

Цель

Молекулярно-генетический маркер рака предстательной железы имеет следующие диагностические показатели:
чувствительность – 24,3 %,
специфичность – 96,8 %,
положительная прогностическая ценность – 90 %,
отрицательная прогностическая ценность – 51,7 %,
диагностическая точность – 57,4 % (табл.1).

Материалы и методы

Исследование экспрессии химерного гена TMPRSS2-ERG выполнялось с помощью набора реагентов, разработанного коллективом авторов и основанного на методе обратной транскрипции с последующей полимеразной цепной реакцией с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (рис. 2).
Праймеры и зонды для амплификации химерного гена TMPRSS2-ERG подбирались авторами работы на переход между образующими данный ген экзонами исходных генов TMPRSS2 и ERG (рис. 3), благодаря чему обеспечивалась строгая специфичность в отношении транскрипта TMPRSS2-ERG и отсутствие специфичности как по отношению к транскриптам исходных генов TMPRSS2 и ERG, так и по отношению к геномной ДНК, что подтверждалось экспериментально.
Для контроля взятия материала, выделения РНК и прохождения реакции обратной транскрипции, параллельно с реакцией на химерный ген TMPRSS2-ERG с тем же образцом кДНК в отдельной пробирке ставилась реакция на простат-специфичный транскрипт гена KLK3, специфичные праймеры для которой также подбирались авторами работы на экзон-экзонный переход, чем обеспечивалась специфичность.

Материалы и методы

Выявление экспрессии химерного гена TMPRSS2-ERG с вероятностью 90% указывает на рак предстательной железы.
У 75,7% пациентов с подтвержденным раком экспрессия данного гена не была выявлена в момент исследования.
Несмотря на это, благодаря высокой специфичности (96,8 %) химерный ген TMPRSS2-ERG может быть использован как дополнительный маркер к уже зарекомендовавшему себя PCA3.

Заключение

Объект исследования – 68 образцов клеточного осадка мочи, полученных после пальцевого ректального массажа предстательной железы:
37 образцов с положительным гистологическим заключением (рак предстательной железы);
31 образец с отрицательным заключением.
Образцы были предоставлены ГАУЗ «Республиканский клинический онкологический диспансер МЗ РТ» (г. Казань) и ГУЗ «Областной клинический онкологический диспансер» (г. Ульяновск).
Ход исследования:
- Объем используемой мочи 20-50 мл;
- Центрифугирование для получения клеточных осадков;
- Добавление фиксатора IntactRNA для стабилизации РНК (ЗАО «Евроген») для транспортировки и хранения клеточных осадков;
- Промывка клеточных осадков от фиксатора и нерастворимых солей в стерильном физиологическим растворе;
- Мягкое центрифугирование;
- Выделение РНК из клеточных осадков мочи с помощью набора реагентов «Проба-НК» (ООО «ДНК-Технология») (рис. 1).

Результаты

Таблица 1. Результаты ПЦР-исследования.

Рис. 1. Схема проведения исследования экспрессии химерного гена в моче пациентов.

Рис. 2. График ПЦР-реакции.

Рис. 3. Графическое изображение химерного гена TMPRSS2-ERG.

Прогностическая значимость маркера TMPRSS2-ERG для диагностики рака предстательной железы

Содержание

Похожие презентации