Реакция нейтрализации токсина антитоксической сывороткой. Реакция нейтрализации вирусов. РИФ

Реакция нейтрализации.
проводится путем введения смеси антиген-антитело животным или в чувствительные тест-объекты (культуру клеток, эмбрионы).
При отсутствии у животных или тест-объектов повреждающего действия микроорганизмов или токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, о специфичности взаимодействия комплекса антиген-антитело.

Реакция нейтрализации вирусов в культуре клеток.
А - цитопатогенный эффект (ЦПЭ) в результате размножения вирусов;
Б - ЦПЭ отсутствует в результате предварительной нейтрализации вирусов антителами.

Реакция нейтрализации токсина (РН) на животных
Для проведения реакции исследуемый материал, в котором предполагается наличие экзотоксина, смешивают с антитоксической сывороткой, выдерживают в термостате и вводят животным (морским свинкам, мышам).
Контрольным животным вводят фильтрат исследуемого материала, не обработанный сывороткой.
В том случае, если произойдет нейтрализация экзотоксина антитоксической сывороткой, животные опытной группы останутся живыми. Контрольные животные погибнут в результате действия экзотоксина.

Реакции с использованием меченых антигенов или антител:
Реакция иммунофлюоресценции
Иммуноферментный анализ
Иммуноблоттинг
Радиоиммунный анализ
Иммуноэлектронная микроскопия

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ).
Метод экспресс-диагностики для выявления антигенов микробов или определения антител при помощи иммунных сывороток, меченных флюорохромными красителями.
2 разновидности РИФ:
Прямой метод РИФ
Непрямой метод РИФ.

Прямая РИФ
Микробные антигены связываются со специфическими флюоресцирующими антителами, в результате чего образуются светящиеся комплексы, наблюдаемые при люминисцентной микроскопии.
Недостаток метода: необходимость иметь большой набор сывороток против каждого антигена.

Непрямая РИФ.
Последовательность метода:
Обработка мазка из взвеси микробов антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки.
Обработка мазка антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами.
Наблюдение в люминесцентный микроскоп светящегося комплекса {микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом}.

Радиоиммунный анализ
высокочувствительный метод, основанный на реакции антиген-антитело с применением антигенов или антител, меченных радионуклидом (125J, 14C, 3Н, 51Сr и др.).
После их взаимодействия отделяют образовавшийся радиоактивный иммунный комплекс и определяют его радиоактивность в соответствующем счетчике (бета- или гамма-излучение): интенсивность излучения прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.