Стрептококки

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА
Стрептококки (лат. Streptococcus) — род грамположительных факультативно анаэробных бактерий. Клетки шарообразной формы диаметром менее 2 мкм располагаются попарно или цепочками. Абсолютное большинство штаммов неподвижно.
Среди стрептококков есть и возбудители различных болезни человека, и представители нормальной микрофлоры, обитающей в ротовой полости, желудочно-кишечном тракте, мочеполовых и дыхательных путях, и широко применяемые в пищевой и фармацевтической промышленности штаммы.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА
Стрептококки устойчивы в окружающей среде.
При температуре 60о С погибают через 30 минут.
В высушенном гное мокроте сохраняются месяцами.
Обычные концентрации дезинфицирующих веществ губят их через 15-20 минут.

КЛАССИФИКАЦИЯ ФЕНОТИПИЧЕСКАЯ
I. по Берджи (1997) — К числу фенотипических классификаций можно условно отнести и классификацию (группировку), приведенную в руководстве по определению бактерий Берджи (1997). В нем 38 видов рода разделены на 4 группы, выделенные по разным критериям:
«Пиогенные»
«Оральные»
«Анаэробные»
«Другие»
В последнем руководстве по определению бактерий (Берджи, 1997) род Streptococcus входит в группу 17 «Грамположительные кокки».
Работа Bergey по систематике бактерий (1984) и определитель Берджи (1997) различаются
в определителе из рода Streptococcus исключены энтерококки, молочнокислые стрептококки, которые соответственно помещены в роды Enterococcus, Lactococcus.

КЛАССИФИКАЦИЯ ФЕНОТИПИЧЕСКАЯ
II. Серологическое группирование — основано на особенности строения группоспецифического полисахарида (субстанции С) различных стрептококков (R.Lancefield, 1933) и позволяет разделить большинство гемолитических и некоторые зеленящие стрептококки на 20 серологических групп, обозначенных заглавными буквами латинского алфавита от А до Н и от К до V.
На сегодняшний день, за исключением стрептококков серогруппы В (S.agalactiae), принадлежность того или иного стрептококка к определенной серогруппе не обязательно совпадает с его видовой принадлежностью, поскольку представители одной и той же серогруппы стрептококков могут представлять собой самостоятельные виды.

КЛАССИФИКАЦИЯ ФЕНОТИПИЧЕСКАЯ
III. Фенотипическая —по типу определяемого на кровяных средах лизиса эритроцитов:
α-гемолитические (зеленящие стрептококки, S.viridans), вызывающие частичный гемолиз и образующие вокруг колоний ореол серовато-зеленого цвета за счет разрушения эритроцитов.
β-гемолитические (гемолитические стрептококки, S.haemoliticus),
вызывающие полный гемолиз эритроцитов с формированием
вокруг колоний прозрачной обесцвеченной зоны, ширина которой
значительно варьирует.
γ-гемолитические (негемолитические стрептококки, S.anhaemoliticus),
не вызывающие гемолиза вокруг колоний.
«необычные» виды стрептококков и другие положительные кокки,
формирующие цепочки.
новые, еще достаточно не охарактеризованные стрептококки.

КЛАССИФИКАЦИЯ МЕДИЦИНСКАЯ
IV. клинико-эпидемиологическая классификация видов стрептококков медицинского значения (Л.А. Ряпис,Н.И. Брико, 2009)

ЦЕЛИ И МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА СТРЕПТОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ (1985 Г.)
Экспресс
методы

ОТБОР ПРОБ
При получении пробы из глотки для бактериологического исследования материал предпочтительно забирать до утреннего туалета полости рта и натощак или через 2 часа после еды. Обследуемого усаживают на стул против источника света, язык фиксируют шпателем. Тампон быстро и осторожно вводят в рот, стараясь не прикасаться к языку и зубам, с легким надавливанием поверхности миндалин и задней стенки глотки берут пробу слизистого отделяемого.
Пробы из носа получают путем введения тампона на глубину 1—2 см в каждую ноздрю и трения о слизистую носа. Если подлежащий исследованию участок поражения не является влажным, тампон для отбора пробы смачивают стерильной дистиллированной водой или физиологическим раствором.

ОТБОР ПРОБ
Пробы из везикул на коже берут после обработки поверхности 70 %-ным спиртом и последующей их пункции с соблюдением правил асептики. При наличии корочек (в случае импетиго) участок поражения обрабатывают 70 %-ным спиртом, корочку удаляют стерильной иглой. Затем с этого участка берут пробу увлажненным тампоном.
При рожистом воспалении с интактной поверхностью отбор материала осуществляют шприцем. С этой целью предварительно в область поражения вводят небольшое количество (например, 0,1 мл) стерильного физиологического раствора, затем жидкость немедленно отсасывают.

ОТБОР ПРОБ
При очаговых и диффузных поражениях нижних отделов дыхательных путей исследуют преимущественно бронхиальное содержимое после откашливания (мокроту) или аспират и смывы, полученные с помощью различных манипуляций и приборов. При этом учитывают, что утренняя порция мокроты наиболее точно отражает состав микрофлоры нижнего отдела дыхательных путей.
Для предотвращения попадания в бронхиальное содержимое посторонней микрофлоры из верхних дыхательных путей и ротовой полости перед откашливанием мокроты промывают рот раствором слабого антисептика (например, фурацилина), а затем кипяченой водой (для удаления антисептика) или только кипяченой водой. Это значительно уменьшает контаминацию мокроты вегетирующими в ротовой полости микроорганизмами.

Третье штрихо-
вание
Первичный посев
тампоны
Первое
штрихование
Второе
штрихование
ИДЕНТИФИКАЦИЯ СТРЕПТОКОККОВ

Культивирование.
Факультативные анаэробы, предпочитают условия с высоким содержанием СО2 до 5-10%
Для создания повышенного уровня СО2 применяются контейнеры и газогенераторы.
Температура инкубации 35-37оС
ИДЕНТИФИКАЦИЯ СТРЕПТОКОККОВ

Тест на каталазу.
На предметное стекло наносят каплю 3% перекиси водорода, в которой платиновой петлей или стерильной деревянной палочкой круговыми движениями растирают исследуемую культуру.
Отрицательная реакция: расщепление перекиси водорода не происходит, пузырьки газа не образуются.
Положительная реакция: под действием каталазы происходит расщепление перекиси водорода, сопровождающееся выделением пузырьков газа.
ИДЕНТИФИКАЦИЯ СТРЕПТОКОККОВ

ТЕСТ НА КАТАЛАЗУ

ИДЕНТИФИКАЦИЯ Β–ГЕМОЛИТИЧЕСКИХ СТРЕПТОКОККОВ

Микроскопия:
Сферические клетки диаметром 0,5-1,0 мкм. Могут образовывать короткие или умеренно длинные цепочки. В мазках из клинического материала располагаются парами, бульонные культуры часто образуют длинные цепочки.
Клиническое значение:
является причиной многих заболеваний человека, от мягких
поверхностных инфекций кожи до системных заболеваний.
фарингит («стрептококковое горло»)
Скарлатина
локализованная кожная инфекция («импетиго»)
Рожа и целлюлит
Некротический фасциит
Стрептококковый синдром токсического шока
Ревматическая лихорадка
Острый постинфекционный гломерулонефрит
http://www.bacteriainphotos.com/bacteria%20under%20microscope/streptococcus%20pyogenes%20microscopy.html
S. pyogenes

Эпидемические заболевания, вызываемые
S. pyogenes

СКАРЛАТИНА

«Пиодермии» Красносельских Татьяна Валерьевна, Профессор кафедры дерматовенерологии с клиникой Первого Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова, доктор медицинских наук, https://my.obr.spb.ru/cabinet#/webinars/lector/a0PD000000VOxO2MAL

«Пиодермии» Красносельских Татьяна Валерьевна, Профессор кафедры дерматовенерологии с клиникой Первого Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова, доктор медицинских наук, https://my.obr.spb.ru/cabinet#/webinars/lector/a0PD000000VOxO2MAL

эктима
Рожистое воспаление
импетиго
Заболевания кожи, вызываемые
S. pyogenes

РОЖИСТОЕ ВОСПАЛЕНИЕ

МИОЗИТ
ЦЕЛЛЮЛИТ
Инвазивные заболевания, вызываемые
S. pyogenes

«Пиодермии» Красносельских Татьяна Валерьевна, Профессор кафедры дерматовенерологии с клиникой Первого Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова, доктор медицинских наук, https://my.obr.spb.ru/cabinet#/webinars/lector/a0PD000000VOxO2MAL

«Пиодермии» Красносельских Татьяна Валерьевна, Профессор кафедры дерматовенерологии с клиникой Первого Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова, доктор медицинских наук, https://my.obr.spb.ru/cabinet#/webinars/lector/a0PD000000VOxO2MAL

«Пиодермии» Красносельских Татьяна Валерьевна, Профессор кафедры дерматовенерологии с клиникой Первого Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова, доктор медицинских наук, https://my.obr.spb.ru/cabinet#/webinars/lector/a0PD000000VOxO2MAL

S. pyogenes

Факторы вирулентности
Клеточная оболочка стрептококка включает себя капсулу и клеточную стенку, состоящую из белков, полисахарида (группоспецифического антигена) и мукопротеида. Бескапсульные штаммы проявляют слабую вирулентность и колонизирующую активность.
М-белок, Т и F-белки, белки-рецепторы, липотейхоевая кислота, групповой полисахарид, пептидогликан, рецепторы для фибриногена, фибронектина, Fc-участка IgG и IgA, альбумина, плазминогена и компонентов комплимента
S. pyogenes

Факторы вирулентности
М-белок стрептококка группы А является одним из основных факторов вирулентности. К настоящему времени у стрептококков группы А выявлено более 100 серотипов М-белка. Ревматизм чаще связывают со стрептококком М-типов 1, 3, 5, 6, 18, а гломерулонефрит – 17, 19, 24, 49 типов. Стрептококки 1-го серотипа способны вызывать как ревматизм, так и гломерулонефрит.
Стрептококки группы А способны продуцировать биологически активные внеклеточные вещества (стрептолизин О и S, стрептокиназа, гиалуронидаза, ДНКаза В, стрептодорназа, липопротеиназа, С5а пептидаза, пирогенные токсины и др.).
S. pyogenes

S. pyogenes
Мукоидные колонии: большие, влажные, напоминающие капельки воды, приподняты над поверхностью агара; обычно вязкие, нередко образуют сливной рост.
http://www.bacteriainphotos.com/bacteria%20under%20microscope/streptococcus%20pyogenes%20microscopy.html
Шероховатые колонии: непрозрачные, уплощенные, иногда со слегка приподнятым центром, шероховатой неровной поверхностью. Эти колонии называют также постмукоидными, так как они развиваются из мукоидных колоний.

S. pyogenes
Гладкие колонии: мелкие, с блестящей поверхностью.
http://www.bacteriainphotos.com/bacteria%20under%20microscope/streptococcus%20pyogenes%20microscopy.html
Размер зоны гемолиза вокруг колоний S.pyogenes и степень его выраженности зависит от качества используемой среды и может в 2-4 раза превышать диаметр колонии; у некоторых – в виде узкого кольца.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. PYOGENES
Для предварительной идентификации S. pyogenes используют определение чувствительности к бацитрацину и наличие пироллидонилариламидазной активности.
Среди β-гемолитических стрептококков только у S. pyogenes оба эти теста положительные, что позволяет практически со 100% гарантией идентифицировать этот вид микроорганизмов.
Arg + дезаминирование аргинина; Esc (V) гидролиз эскулина;

ИДЕНТИФИКАЦИЯ Β–ГЕМОЛИТИЧЕСКИХ СТРЕПТОКОККОВ

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. PYOGENES
Бацитрациновый тест.
Чистую культуру β-гемолитических стрептококков (3-4 колонии или полную петлю бульонной культуры) рассевают штрихом на чашку агара с кровью. В центр помещают диск и инкубируют в течение ночи при 35-37С. Зона ингибиции вокруг диска или ее отсутствие позволяют отнести штамм предположительно из серогруппы А по бацитрацину или не из серогруппы А.
Небольшая часть штаммов серогрупп С (около 5%) и
G (около 10%) проявляет такую же чувствительность
к бацитрацину, как и стрептококки серогруппы А.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. PYOGENES
Бацитрациновый тест – Результат реакции зависит от нескольких факторов:
1. Диски должны содержать 0,04-0,05 МЕ бацитрацина. Диски, предназначенные для определения чувствительности к бацитрацину, содержащие 10 МЕ, не применяют (могут быть ложноположительными).
2. Необходим густой газон, если посевной материал излишне разведен, создается впечатление чувствительности к бацитрацину.
3. Исследуют только чистую культуру. Диски с бацитрацином, помещенные на первичные чашки с посевом материала из зева, позволяют идентифицировать только 50-65% стрептококков серогруппы А.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. PYOGENES
Бацитрациновый тест – Результат реакции зависит от нескольких факторов:
4. Тестируют только β-гемолитические стрептококки, т.к. многие α-гемолитические стрептококки и пневмококки ингибируются бацитрацином.
5. Тест считают положительным при наличии любой зоны ингибирования роста.
6. Каждую новую серию дисков испытывают с известными штаммами стрептококков серогруппы А и не из серогруппы А, чтобы выявить различие между сериями и стабильность препарата.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. PYOGENES
PYR-тест.
Ориентировочный метод идентификации групповой принадлежности S.pyogenes, основанный на способности микроорганизмов гидролизовать L-пирролидонил-β-нафтиламид или β-нафтиламид L-пироглютаминовой кислоты (PYR), что приводит к образованию β-нафтиламина. Его выявляют в присутствии реагента N1N-диметиламиноциннамальдегида.
Приблизительно 98% СГА дают положительную реакцию в этом тесте.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. PYOGENES
Метод диска (быстрый)
Смочить PYR тест-диск 10 мкл стерильной дистиллированной или деионизированной водой.
(диск не наводнять).
Поместить 5-10 колоний испытуемого штамма (18-24 часовая культура) на поверхность диска с помощью петли и слегка размазать их.
Инкубировать диск в течение 1-2 минут при комнатной температуре.
После инкубации добавить 1 каплю N, N-диметиламиноциннамальдегида.
Наблюдать за развитием красного цвета в течение 1-2 минут.
В бульоне
Инокулируют PYR бульон 3-5 колониями испытуемого штамма (18-24 часовая культура).
Инкубация пробирки аэробно при 35-37 ° С в течение 4 часов.
Добавляют 2-3 капли реагента PYR и наблюдают за изменением цвета.
Появление красного цвета в течение 1-2 минут.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. PYOGENES
Серологические исследования.
Лабораторная диагностика стрептококковых инфекций включает в себя не только микробиологический, но и серологический раздел. Выделение стрептококков не всегда свидетельствует об их причастности к патологии, т.к. довольно часто человек является здоровым носителем.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. PYOGENES
Серологические исследования.
Результаты серологических исследований, у лиц с различными заболеваниями стрептококковой этиологии (по Столлерману)

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. PYOGENES
Серологические исследования –
Определение антител к стрептолизину-О
В классическом варианте метод основан на нейтрализации антителами (антистрептолизином-О – АСЛО) антигена стрептококка стрептолизина-О, вызывающего гемолиз эритроцитов.
Определение АСЛО – первая стандартизованная серологическая методика для выявления АТ к стрептококку группы А и до настоящего времени наиболее широко используемая в разных регионах земного шара

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. PYOGENES
Серологические исследования –
Определение антител к стрептолизину-О
В России определение активности анти-О-стрептолизина в сыворотке крови входит в перечень лабораторного обеспечения диагностики и лечения пациентов в учреждениях здравоохранения РФ (Приказ Минздрава РФ от 25.12.1997).
При однократном исследовании повышенными являются титры не менее 200 или 25 единиц Тодда у взрослых.
Рекомендуется повторное тестирование с двухнедельным интервалом для контроля развития заболевания.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. PYOGENES
Серологические исследования –
Определение антител к стрептолизину-О
Уровень АСЛО повышается в острый период инфекции (7-14-й день) и снижается в период реконвалесценции и выздоровления.
Максимальный уровень АТ к стрептолизину-О регистрируется через 3-5 недель от начала заболевания.
Стойкое и длительное повышение активности после ангины может быть предвестником ревматического процесса.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. PYOGENES
Серологические исследования –
Определение антител к гиалуронидазе
Стрептококковая антигиалуронидаза представляет собой антитела к гиалуронидазе – ферменту стрептококка группы А, расщепляющему гиалуроновую кислоту или ее соли.
Метод основан на нейтрализации специфическими антителами сыворотки исследуемой крови и вносимого в нее антигена – фермента гиалуронидазы, что проявляется в сохранении мутности, образованной гиалуроновой кислотой или ее соединениями в соответствующем буферном растворе.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. PYOGENES
Серологические исследования –
Определение антител к гиалуронидазе
Определение АТ к гиалуронидазе в сыворотке крови входит в перечень лабораторного обеспечения диагностики и лечения пациентов в учреждениях здравоохронения РФ (Приказ Минздрава РФ от 25.12.1997) для выявления скрыто протекающих форм ревмокардита, активности ревматического процесса, а также для дифференциации ревматизма от инфекционного полиартрита.
Титр антител к гиалуронидазе в сыворотке крови у взрослых в норме менее 128 ЕД/мл.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. PYOGENES
Серологические исследования –
Определение антител к дезоксирибонуклеазе В
Стрептококк группы А вырабатывает четыре разных по антигенному составу дезоксирибонуклеазы (ДНК-азы), обозначаемые А, В, С и Д. наибольшее значение среди них имеет ДНК-аза В.
Определение основано на нейтрализации АТ исследуемой сыворотки крови вносимого препарата ДНК-азы В, что препятствует расщеплению используемого субстрата – окрашенного комплекса из ДНК и красителя метиленового зеленого.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. PYOGENES
Серологические исследования –
Определение антител к дезоксирибонуклеазе В
Распад комплекса сопровождается его обесцвечиванием.
В сыворотке крови у взрослых титр АТ к ДНК-азе В в норме менее 120 ЕД/мл, у детей школьного возраста – менее 200 ЕД/мл.
Повышенные титры АТ к ДНК-азе В выявляют в 60% случаев стрептококкового гломерулонефрита.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. PYOGENES
Серологические исследования. Следует учитывать:
отдельные штаммы СГА не секретируют некоторые экстрацеллюлярные продукты и при инфицировании соответствующие АТ не образуются;
синтез экстрацеллюлярных продуктов может блокироваться антибиотиками раньше, чем синтез компонентов микробной клетки, в связи с чем у части больных с манифестной стрептококковой инфекцией на фоне АБ-терапии повышение уровня АТ не определяется;

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. PYOGENES
Серологические исследования.
при постстрептококковых заболеваниях активность иммунопатологических процессов может поддерживаться продуктами биодеградации микробных клеток и L-формами стрептококка без участия внеклеточных продуктов;
стрептококки некоторых других серологических групп могут продуцировать те или иные экстрацеллюлярные ферменты (например стрептококки групп C и G могут продуцировать стрептолизин-О).

ИДЕНТИФИКАЦИЯ Β–ГЕМОЛИТИЧЕСКИХ СТРЕПТОКОККОВ

S.agalactiae (Group B streptococcus, GBS)
Микроскопия:
Сферические клетки диаметром 0,5-1,0 мкм. Могут образовывать короткие цепочки. В мазках из клинического материала располагаются парами.
Клиническое значение:
У новорожденных и детей может вызывать сепсис и пневмонию
(на 1-5-й дни после рождения), менингит (10-60-е дни),
конъюнктивит, средний отит, у взрослых – менингит,
пневмонию, остеомиелит, артрит, пиелонефрит.
У женщин наблюдаются эндометриты, инфекции
мочевыводящих путей.
Описаны случаи летальных исходов от некротизирующего
фасциита и синдрома токсического шока (Tang W.M., 2000).
Частота колонизации беременных составляет 10-30%, а риск
заражения новорожденных в случае колонизации матери – 40-70%.
http://www.bacteriainphotos.com/bacteria%20under%20microscope/streptococcus%20agalactiae%20microscopy.html

НОВОРОЖДЕННЫЙ, ПОРАЖЕННЫЙ S.AGALACTIAE

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. AGALACTIAE
Возбудитель заболеваний.
S.agalactiae у новорожденных и детей может вызывать сепсис и пневмонию (на 1-5-й дни после рождения), менингит (10-60-е дни), конъюнктивит, средний отит, у взрослых – менингит, пневмонию, остеомиелит, артрит, пиелонефрит.
У женщин наблюдаются эндометриты, инфекции мочевыводящих путей.
Описаны случаи летальных исходов от некротизирующего фасциита и синдрома токсического шока (Tang W.M., 2000).
Частота колонизации беременных составляет 10-30%, а риск заражения новорожденных в случае колонизации матери – 40-70%.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. AGALACTIAE
Рост на агаре.
Быстро растут на агаре с кровью, на котором выявляются штаммы, вызывающие β-гемолиз (с узкой зоной) и α-гемолиз (двойная зона), а также штаммы, не способные лизировать эритроциты.
Некоторые штаммы синтезируют желтый, оранжевый или кирпично-красный пигменты, синтез которых усиливается при добавлении в среду культивирования крахмала или при выращивании в анаэробных условиях.
Отдельные штаммы образуют бактериоцины. Их продуценты могут быть чувствительны к бактериоцинам других штаммов.

S.agalactiae (Group B streptococcus, GBS)
Бета-гемолитические колонии Streptococcus agalactiae (стрептококк группы B, GBS) на агаре овечьей крови. Выращивание 24 часа, аэробная атмосфера, 37 ° C.
http://www.bacteriainphotos.com/bacteria%20under%20microscope/streptococcus%20pneumoniae%20microscopy.html
Колонии стрептококков группы В часто имеют менее выраженные зоны бета-гемолиза, чем другие бета-гемолитические стрептококки (например, из группы А или С); некоторые штаммы группы B не являются гемолитическими. Выращивание 24 часа, аэробная атмосфера, 37 ° C.

S.agalactiae (Group B streptococcus, GBS)
Streptococcus agalactiae на гранадном агаре (среда с крахмалом), анаэробная инкубация.
http://www.bacteriainphotos.com/bacteria%20under%20microscope/streptococcus%20pneumoniae%20microscopy.html
Красные колонии S.agalactiae в гранадном агаре. Вагинальная культура 18-часовая анаэробая инкубация 36 ° C.

S.agalactiae (Group B streptococcus, GBS)
Колонии Streptococcus agalactiae в хромогенной среде (хромогенный агар ChromID CPS)
http://www.bacteriainphotos.com/bacteria%20under%20microscope/streptococcus%20pneumoniae%20microscopy.html

ИДЕНТИФИКАЦИЯ Β–ГЕМОЛИТИЧЕСКИХ СТРЕПТОКОККОВ
Поскольку групповой антиген В состоит из рамнозы, N-ацетилглюкозамина и галактозы, а рамноза является наиболее активной в иммунологическом отношении, наблюдается перекрестная реакция между стрептококками групп В и С, в структуре полисахарида которого (группа С) рамноза также занимает доминирующее положение.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. AGALACTIAE
Серотипирование.
Серотипирование основано на полисахаридах капсулы (Ia, Ib, II, III, IV) и белках (Ic, R, X).
Выявлено 8 серологических типов S.agalactiae (Ia, Ib, Ic, II, III, IV, R, X).
Полисахаридные антигены причисляют к факторам вирулентности, индуцирующим образование типоспецифических протективных антител.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. AGALACTIAE
Все штаммы гидролизуют гиппурат натрия, что используется для дифференциации S.agalactiae от других стрептококков.
С учетом уникальной гемолитической реакции (очень узкая зона гемолиза), постановка САМР-теста и гиппуратной реакции позволяют достаточно надежно идентифицировать S.agalactiae.
Arg + дезаминирование аргинина.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. AGALACTIAE
Гидролиз гиппурата натрия
Тест основан на способности стрептококков серогруппы В вызывать гидролиз гиппурата натрия (темно-фиолетовое окрашивание) и является альтернативным для предварительной идентификации этих стрептококков.
НО и 98% энтерококков так же дают положительный результат

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S. AGALACTIAE
CAMP-тест (от фамилий авторов теста: Christie, Atkins, Munch-Peterson).
Специфичен для ориентировочной идентификации стрептококков группы В, синтезирующих способный к диффузии внеклеточный белок («САМР-фактор»), усиливающий гемолиз при взаимодействии с β-токсином S.aureus.

S.agalactiae (Group B streptococcus, GBS)
CAMP reaction. Реакцию учитывают через 18-24 ч культивирования при 37С. Положительный результат – образование «клина» гемолиза между посевами стрептококка и стафилококка. Параллельно испытывают контрольные штаммы стрептококков серогрупп А, В, С и G.
http://www.bacteriainphotos.com/bacteria%20under%20microscope/streptococcus%20pneumoniae%20microscopy.html
S.pyogenes
S.aureus

ИДЕНТИФИКАЦИЯ Β–ГЕМОЛИТИЧЕСКИХ СТРЕПТОКОККОВ

Реакция Фогес-Проскауэра (VP)
Тест основан на выявлении ацетоина (ацетил-метилкарбинол) – промежуточного продукта в превращении пировиноградной кислоты (образующейся при расщеплении глюкозы) по бутиленгликолевому пути.
Контроль качества осуществляют с эталонными культурами K.pneumoniae АТСС 13883 (положительный контроль) и E.coli АТСС 25922 (отрицательный контроль).
Вишнёвая окраска среды говорит о положительном результате теста
ИДЕНТИФИКАЦИЯ Β–ГЕМОЛИТИЧЕСКИХ СТРЕПТОКОККОВ

ИДЕНТИФИКАЦИЯ Β–ГЕМОЛИТИЧЕСКИХ СТРЕПТОКОККОВ
На заметку
Среди перечисленных в таблице стрептококков подвид S. dysgalactiae subsp. dysgalactiae является единственным, не проявляющим гемолитическую активность.
Вместе с тем выявлены негемолитические варианты S.pyogenes, S.agalactiae и отдельные представители группы Anginosus.
Остается открытым вопрос, существуют ли негемолитические варианты других видов стрептококков, которые считаются β-гемолитическими.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ Β–НЕГЕМОЛИТИЧЕСКИХ СТРЕПТОКОККОВ
образующих цепочки* (по Facklam R., 2002).

ИДЕНТИФИКАЦИЯ Β–НЕГЕМОЛИТИЧЕСКИХ СТРЕПТОКОККОВ
На заметку
Проводить дифференциацию α-гемолитических и негемолитических культур на кровяном агаре трудно. Дело в том, что проявление α-гемолиза зависит как от источника крови, так и условий культивирования.
Принято считать, что перекись водорода разрушает эритроциты и высвобождает гемоглобин в среду вокруг колоний, в результате чего формируется зеленоватая зона. При отсутствии в среде культивирования кислорода перекись водорода не образуется, и α-гемолитические стрептококки вдут себя как негемолитические.

S. pneumoniae
Микроскопия:
Ланцетовидные (яйцевидные) кокки в коротких цепочках, диплококки и одиночные кокки.
Клиническое значение:
Несмотря на название, микроорганизм вызывает многие виды
пневмококковых инфекций, отличных от пневмонии.
Острый синусит
Средний отит
Менингит
Бактериемия
Сепсис
Остеомиелит
http://www.bacteriainphotos.com/bacteria%20under%20microscope/streptococcus%20pneumoniae%20microscopy.html
Септический артрит
Эндокардит
Перитонит
Перикардит
Целлюлит
Энцефалит мозга

S. pneumoniae
Пневмококки при росте на КА могут давать несколько типов колоний, что зависит от степени выраженности капсулы.
Колонии с сильно развитой капсулой,
например серотипа 3, могут иметь несколько
миллиметров в диаметре и быть настолько
слизистыми, что напоминают каплю масла
на агаровой поверхности
http://www.bacteriainphotos.com/bacteria%20under%20microscope/streptococcus%20pneumoniae%20microscopy.html

S. pneumoniae
Альфа-гемолитические колонии Streptococcus pneumoniae на агаре овечьей крови. Выращивание 24 часа в аэробной атмосфере, обогащенной 5% CO2, 37 ° C.
http://www.bacteriainphotos.com/bacteria%20under%20microscope/streptococcus%20pneumoniae%20microscopy.html
Кратерподобный вид колоний Streptococcus pneumoniae. Культивируется на агаре Колумбии с овечьей кровью, 24 часа в аэробной атмосфере, обогащенной 5% диоксидом углерода, 37 ° C.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S.PNEUMONIAE
РА на стекле и оптохиновый тест являются быстрыми и наименее трудоемкими методами, чаще других применяемыми для идентификации пневмококков.
BS + желчный тест.
Mel + кислота из мелибиозы.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S.PNEUMONIAE
Оптохиновый тест
Метод основан на способности оптохина (этилгидрокупреина гидрохлорида) селективно подавлять рост пневмококка, но не других зеленящих стрептококков. Примерно 4-5% пневмококков резистентны к оптохину, а рост некоторых "зеленящих" стрептококков подавляется оптохином (с образованием узкой зоны задержки роста).

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S.PNEUMONIAE
Желчный тест
Соли желчи (в особенности дезоксихолат натрия и таурохолат натрия) обладают способностью избирательно лизировать колонии S.pneumoniae на агаре или в бульоне.
Метод основан на активации пневмококковых аутолизинов –
ферментов, участвующих в синтезе клеточной стенки.
Соли желчных кислот активируют аутолизины большинства
штаммов, что приводит к визуальному лизису S.pneumoniae
в течение 0,5-2 ч.
Примерно 86% пневмококков полностью лизируются
в присутствии солей желчи.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ S.PNEUMONIAE
Серологический тест
Этот метод может использоваться для ускоренного выявления пневмококка непосредственно с чашки первичного посева. Однако и в этом случае имеется ограничение. Около 3,5% штаммов пневмококков являются неагглютинабельными и их трудно дифференцировать от α-гемолитических стрептококков.
Для идентификации таких культур предложен зонд на основе специфической последовательности рРНК, который из числа нетипируемых штаммов выявил 22% штаммов, ошибочно отнесенных к пневмококкам (P.Geslin et al., 1997)

ИДЕНТИФИКАЦИЯ Β–НЕГЕМОЛИТИЧЕСКИХ СТРЕПТОКОККОВ
образующих цепочки* (по Facklam R., 2002).

ИДЕНТИФИКАЦИЯ СЕРОГРУППЫ D (BOVIS GROUP)
Желче-эскулиновый тест
Обычно он выполняется на косяке из желче-эскулинового агара или на чашке с этой средой. Исследование культуры засевают штрихом. Положительные в этом тесте микроорганизмы растут в присутствии 40% желчи и гидролизуют эскулин. При этом происходит почернение желче-эскулиновой среды.
Большинство стрептококков группы D и энтерококков дают положительную реакцию в течение 24 ч, редко гидролиз эскулина становится явным через 48 ч инкубации при 37С.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ СЕРОГРУППЫ D (BOVIS GROUP)
Желче-эскулиновый тест

ИДЕНТИФИКАЦИЯ VIRIDANS STREPTOCOCCI
Клиническое значение зеленящих стрептококков различных видов существенно отличается.
Удельный вес стрептококков группы Angionosus среди зеленящих стрептококков составляет более 80%.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ VIRIDANS STREPTOCOCCI

ИДЕНТИФИКАЦИЯ VIRIDANS STREPTOCOCCI

ИДЕНТИФИКАЦИЯ VIRIDANS STREPTOCOCCI

ИДЕНТИФИКАЦИЯ VIRIDANS STREPTOCOCCI

ИДЕНТИФИКАЦИЯ «НЕОБЫЧНЫХ» ВИДОВ СТРЕПТОКОККОВ
(по Facklam R., 2002).
Примечание:
LAP – лейтинаминопептидаза; PYR – пирролидонилариламидаза; NaCl – рост в бульоне с 6,5% NaCl;
ВЕ – желче-эскулиновый тест; Esc – гидролиз эскулина; Arg - дезаминирование аргинина;
VP - реакция Фогес-Проскауэра; Hip - гидролиз гиппурата; Man, Sbl - кислота из маннита и сорбита.

Схема дифференциации
стрептококков и энтерококков
Каталаза
+
Гиппурат

В исследование включены изоляты S. pneumoniae (n = 519), собранные в рамках многоцентрового исследования антибиотикорезистентности в 28 ЛПУ 18 городов России с января 2014 г. по декабрь 2017 г.
STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE В РОССИИ: ПЕГАС 2014–2017 РЕЗУЛЬТАТЫ МНОГОЦЕНТРОВОГО ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE В РОССИИ: ПЕГАС 2014–2017 РЕЗУЛЬТАТЫ МНОГОЦЕНТРОВОГО ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE В РОССИИ: ПЕГАС 2014–2017 РЕЗУЛЬТАТЫ МНОГОЦЕНТРОВОГО ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE В РОССИИ: ПЕГАС 2014–2017 РЕЗУЛЬТАТЫ МНОГОЦЕНТРОВОГО ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE В РОССИИ: ПЕГАС 2014–2017 РЕЗУЛЬТАТЫ МНОГОЦЕНТРОВОГО ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE В РОССИИ: ПЕГАС 2014–2017 РЕЗУЛЬТАТЫ МНОГОЦЕНТРОВОГО ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE В РОССИИ: ПЕГАС 2014–2017 РЕЗУЛЬТАТЫ МНОГОЦЕНТРОВОГО ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE В РОССИИ: ПЕГАС 2014–2017 РЕЗУЛЬТАТЫ МНОГОЦЕНТРОВОГО ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE В РОССИИ: ПЕГАС 2014–2017 РЕЗУЛЬТАТЫ МНОГОЦЕНТРОВОГО ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

ИДЕНТИФИКАЦИЯ СТРЕПТОКОККОВ
ПОГРАНИЧНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ EUCAST, ВЕРСИЯ 8.0, ДЕЙСТВУЕТ С 01.01.2018

ИДЕНТИФИКАЦИЯ СТРЕПТОКОККОВ
ПОГРАНИЧНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ EUCAST, ВЕРСИЯ 8.0, ДЕЙСТВУЕТ С 01.01.2018

Α-ГЕМОЛИЗИНЫ НЕ ДИФФУНДИРУЮТ В АГАР, ПОЭТОМУ ЗОНА Α-ГЕМОЛИЗА ЧАСТО СОВПАДАЕТ С ЗОНОЙ РОСТА БАКТЕРИЙ (Т.Е. ГЕМОЛИЗ ЧАСТО ЯВЛЯЕТСЯ МАРКЕРОМ РОСТА МИКРООРГАНИЗМОВ).
КАК ПРАВИЛО, РОСТ МИКРООРГАНИЗМОВ НАБЛЮДАЕТСЯ НАД ВСЕЙ ЗОНОЙ Α-ГЕМОЛИЗА. В ЭТОМ СЛУЧАЕ УЧЕТ ЗОН ПОДАВЛЕНИЯ НЕОБХОДИМО ПРОВОДИТЬ ПО КРАЮ ЗОНЫ Α-ГЕМОЛИЗА
ОДНАКО В НЕКОТОРЫХ СЛУЧАЯХ ЗОНА Α-ГЕМОЛИЗА ВЫХОДИТ ЗА ГРАНИЦЫ РОСТА. ДЛЯ ОБЛЕГЧЕНИЯ УЧЕТА ЗОН ПОДАВЛЕНИЯ РОСТА НА СРЕДЕ МХА-П, ЧАШКУ СЛЕДУЕТ РАССМАТРИВАТЬ ПОД УГЛОМ
Измерение зон подавления роста

НЕЧЕТКИЕ ЗОНЫ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ S.PNEUMONIAE
ПРИ УЧЕТЕ РЕЗУЛЬТАТОВ МЕЛКИЕ КОЛОНИИ, ЗАМЕТНЫЕ НА ЧАШКЕ C РАССТОЯНИЯ 30 СМ ОТ ГЛАЗ УЧИТЫВАЮЩЕГО, НЕОБХОДИМО ПРИНИМАТЬ ВО ВНИМАНИЕ.
ПРИСУТСТВИЕ МЕЛКИХ КОЛОНИЙ ВБЛИЗИ КРАЯ ЗОНЫ ПОДАВЛЕНИЯ РОСТА МОЖЕТ БЫТЬ СВЯЗАНО С ИЗБЫТОЧНОЙ ВЛАЖНОСТЬЮ СРЕДЫ МХА-П, ВО ИЗБЕЖАНИЕ ЧЕГО, ЧАШКИ С АГАРОМ МОЖНО ПОДСУШИВАТЬ ПЕРЕД ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ
Измерение зон подавления роста

Β-ГЕМОЛИЗИНЫ ДИФФУНДИРУЮТ В АГАР, ПОЭТОМУ ОБЫЧНО НАД ЗОНОЙ ГЕМОЛИЗА НЕТ РОСТА МИКРООРГАНИЗМОВ.
ДЛЯ ЛУЧШЕЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ЗОНЫ ПОДАВЛЕНИЯ РОСТА И ЗОНЫ ГЕМОЛИЗА СЛЕДУЕТ НЕСКОЛЬКО РАЗ НАКЛОНИТЬ ЧАШКУ ВПЕРЕД-НАЗАД.
Измерение зон подавления роста

СТРЕПТОКОККИ ГРУПП A, B, C И G.

СТРЕПТОКОККИ ГРУПП A, B, C И G.

СТРЕПТОКОККИ И БЕТА-ЛАКТАМЫ
ПОГРАНИЧНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ EUCAST, ВЕРСИЯ 8.0, ДЕЙСТВУЕТ С 01.01.2018

СКРИНИНГ S.PNEUMONIAE РЕЗИСТЕНТНОСТИ К Β-ЛАКТАМАМ

СТРЕПТОКОККИ ГРУПП A, B, C И G.

СТРЕПТОКОККИ И MLSB-ГРУППА
ПОГРАНИЧНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ EUCAST, ВЕРСИЯ 8.0, ДЕЙСТВУЕТ С 01.01.2018

СТРЕПТОКОККИ И MLSB-ГРУППА
ПОГРАНИЧНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ EUCAST, ВЕРСИЯ 8.0, ДЕЙСТВУЕТ С 01.01.2018

СТРЕПТОКОККИ ГРУПП A, B, C И G.

СТРЕПТОКОККИ И ФТОРХИНОЛОНЫ
ПОГРАНИЧНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ EUCAST, ВЕРСИЯ 8.0, ДЕЙСТВУЕТ С 01.01.2018

СТРЕПТОКОККИ ГРУПП A, B, C И G.

СТРЕПТОКОККИ ГРУПП A, B, C И G.

СТРЕПТОКОККИ ГРУПП A, B, C И G.

СТРЕПТОКОККИ ГРУПП A, B, C И G.