Выявление микобактерий туберкулеза методом микроскопии

«О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации»
Утвердить:
1.10. Инструкцию по унифицированным методам микроскопических исследований для выявления кислотоустойчивых микобактерий в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений.
Ю.Л. Министр Шевченко
Приказ Минздрава РФ от 21 марта 2003 г. № 109

I. Общие положения
Преимущество бактериоскопии заключается в быстроте получения результата (от 1 часа) и относительной простоте исследования.
Метод прямой бактериоскопии осуществляется с помощью световой микроскопии мазков, окрашенных по Ziehl-Neelsen, или люминесцентной микроскопии с окраской флюорохромными красителями.
Результаты выражаются в полуколичественных категориях, отражающих содержание микобактерий в исследуемом препарате.

II. Показания и противопоказания к применению метода
Метод осуществляется в клинико-диагностических лабораториях ОЛС при проведении первичного обследования у лиц с подозрением на заболевание туберкулезом.
Противопоказаний к применению метода нет.

III. Возможности метода микроскопического исследования при выявлении кислотоустойчивых микобактерий
Позволяет выявить кислотоустойчивые микобактерии при их содержании порядка 5000-10000 и более микробных клеток в 1 мл мокроты, что характерно для больных с прогрессирующими формами процесса.
Для увеличения чувствительности метода следует исследовать не менее трех проб мокроты.

IV. Организация рабочего места и оборудование для микроскопических исследований
В объединенных клинико-диагностических лабораториях для микроскопических исследований на кислотоустойчивые микобактерии должно выделяться отдельное помещение.
В помещении для микроскопии должно быть четыре зоны:
I. Зона для приема и регистрации диагностического материала
II. Зона для приготовления и окраски мазков
III. Рабочее место для микроскопии
IV. Место для регистрации результатов исследований

V. Режимы и кратность микроскопического обследования пациентов
При первом обращении больного к врачу с симптомами, подозрительными на туберкулез, необходимо в течение 2-3 дней исследовать не менее 3 порций мокроты, собранных под наблюдением медицинского персонала.
.
Материал для исследования на кислотоустойчивые микобактерии собирают в стерильные флаконы с плотно завинчивающимися крышками.

VI. Сбор диагностического материала
При легочных процессах чаще всего исследуют следующие материалы:
мокроту;
отделяемое верхних дыхательных путей,
промывные воды бронхов;
бронхоальвеолярные смывы;
материал, получаемый при бронхоскопии,транстрахеальной и внутрилегочной биопсии;
аспират из бронхов;
мазки из гортани;
экссудаты;
промывные воды желудка (преимущественно у детей).
При внелегочных формах заболевания пригоден самый разнообразный материал:
различные тканевые жидкости (спинномозговая, плевральная, перикардиальная, синовиальная, асцитическая, кровь, гной),
пунктаты костного мозга,
резецированные ткани того или иного органа, полученные при биопсиях или оперативных вмешательствах,
гнойно-некротические массы,
грануляции,
соскобы синовиальных оболочек,
лимфатические узлы или пунктаты их содержимого,
моча

VII. Хранение и транспортировка диагностического материала
Собранный материал необходимо как можно быстрее доставлять в лабораторию;
в случае невозможности немедленной доставки материал сохраняется в холодильнике при 5-10°С не более 3 дней;
при более длительном хранении во избежание получения неверных результатов необходима консервация материала.
Во время транспортировки материал следует предохранять от воздействия прямых солнечных лучей и тепла.
В летний период (особенно в районах с теплым климатом) консервация необходима, если транспортировка занимает более 24 часов.
В условиях Крайнего Севера диагностический материал может подвергаться воздействию значительных колебаний температуры,
допускается пересылка материала в замороженном состоянии без консервации.
Недопустимо после размораживания повторное замораживание диагностического материала, что ведет к нарушению структуры и тинкториальных свойств бактериальных клеток.

VIII. Правила работы с диагностическим материалом
Поступающие для исследования пробы материала принимают на отдельном столе в одноразовых перчатках и масках;
- перед тем, как открыть транспортировочный контейнер, необходимо протереть его наружную поверхность тампоном, смоченным соответствующим дезинфицирующим средством
- аккуратно открыть крышку контейнера и проверить, нет ли на поверхности флаконов следов протечки материала. Ни в коем случае не использовать поврежденные флаконы (разбитые или с трещинами) - уничтожить их и запросить новый образец, отметив в сопроводительном бланке;
- проверить наличие идентификационных номеров на флаконах с материалом и сверить их с номерами в сопроводительных документах;
- продезинфицировать внутреннюю поверхность транспортировочного контейнера;
- после работы с флаконами уничтожить одноразовые перчатки и вымыть руки с мылом;
- подписать сопроводительные документы;
- занести в регистрационный лабораторный журнал сведения о каждом пациенте и полученном от него материале.
Бланки направлений следует желательно подвергнуть стерилизации в сухожаровом шкафу в течение 30 минут при 85°С.

IX. Приготовление мазков для микроскопических исследований
9.1. Оборудование и реактивы для приготовления мазков из диагностического материала при окраске по методу Ziehl-Neelsen

IX. Приготовление мазков для микроскопических исследований
9.3. Приготовление мазков из нативного материала
9.4. Фиксация мазков. Ни в коем случае не допускается фиксация сырых мазков над пламенем горелки.

X. Методы окраски диагностических препаратов
10.1. Окраска препаратов для световой микроскопии по методу Ziehl-Neelsen
окраска фуксином (с подогреванием)

X. Методы окраски диагностических препаратов

X. Методы окраски диагностических препаратов

X. Методы окраски диагностических препаратов
Микобактерии туберкулеза окрашиваются В результате в малиново-красный цвет, а другие микроорганизмы и клеточные элементы - в голубой.

XIII. Учет результатов микроскопического исследования
Микроскопическое исследование должно быть не только качественным, но обязательно и количественным
Положительные результаты исследования рекомендуется вписывать в журнал красными чернилами
Ответ с результатами исследования следует выдавать не позже, чем через 24 часа после получения проб.

Градация результатов микроскопического исследования при окраске
по методу Ziehl-Neelsen

XIV. Контроль качества микроскопического выявления кислотоустойчивых микобактерий
Контроль качества лабораторных исследований осуществляется в нескольких формах:
а) внутрилабораторный контроль качества выполняемых исследований;
б) внешний контроль качества микроскопических лабораторных исследований.
14.3. Повторный анализ клинических образцов и препаратов в лабораториях более высокого уровня
Определенная доля исследованных и сохраненных мазков подвергается повторному анализу в курирующих лабораториях по установленным правилам.
Обычно реанализу подвергают все положительные мазки и каждый десятый отрицательный.

"ОБ УТВЕРЖДЕНИИ УЧЕТНОЙ ДОКУМЕНТАЦИИ ПО ВЫЯВЛЕНИЮ ТУБЕРКУЛЕЗА МЕТОДОМ МИКРОСКОПИИ"
(ВМЕСТЕ С ИНСТРУКЦИЯМИ ПО ЗАПОЛНЕНИЮ УЧЕТНЫХ ФОРМ N 05-ТБ/У, N 04-ТБ/У, N 04-1-ТБ/У, N 04-2-ТБ/У)
Приказ Минздравсоцразвития РФ от 02 октября 2006 г. № 690

Утвердить:
учетную форму N 05-ТБ/у "Направление на проведение микроскопических исследований на туберкулез" согласно приложению N 1;
- учетную форму N 04-ТБ/у "Журнал регистрации микроскопических исследований на туберкулез" согласно приложению N 2;
- учетную форму N 04-1-ТБ/у "Журнал регистрации диагностического материала, собранного для микроскопических исследований на туберкулез" согласно приложению N 3;
- учетную форму N 04-2-ТБ/у "Сопроводительный лист доставки диагностического материала для микроскопического исследования на туберкулез" согласно приложению N 4;

Утвердить:
- инструкцию по заполнению учетной формы N 05-ТБ/у "Направление на проведение микроскопического исследования на туберкулез" согласно приложению N 5;
- инструкцию по заполнению учетной формы N 04-ТБ/у "Журнал регистрации микроскопических исследований на туберкулез" согласно приложению N 6;
- инструкцию по заполнению учетной формы N 04-1-ТБ/у "Журнал регистрации диагностического материала, собранного для микроскопических исследований на туберкулез" согласно приложению N 7;
- инструкцию по заполнению учетной формы N 04-2-ТБ/у "Сопроводительный лист доставки диагностического материала для микроскопического исследования на туберкулез" согласно приложению N 8
. Министр М.ЗУРАБОВ

14. Результаты микроскопического исследования

ИНСТРУКЦИЯ
ПО ЗАПОЛНЕНИЮ УЧЕТНОЙ ФОРМЫ N 05-ТБ/У
"НАПРАВЛЕНИЕ НА ПРОВЕДЕНИЕ МИКРОСКОПИЧЕСКИХ
ИССЛЕДОВАНИЙ НА ТУБЕРКУЛЕЗ"
Графы 3-7 заполняются в соответствии с результатами микроскопических исследований, которые переносятся из Журнала регистрации исследований.
Отрицательные результаты исследования записываются в графу 3
Положительные результаты исследования с градацией массивности бактериовыделения - в графы 4-7.
При скудном бактериовыделении (единичные микобактерии в 100 полях зрения) указывается точное количество микобактерии в 100 полях зрения (графа 4)
В графах 5, 6, 7 дается количественная оценка положительного результата в соответствии с таблицей приказа Минздрава России от 21 марта 2003 г. N 109 "О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации»
В п. 15 - день, месяц и год выдачи результата
В п. 16 - фамилия и инициалы медицинского работника, ответственного за проведение микроскопических исследований, и ставится его подпись.