Презентации, доклады, проекты без категории

Экспрессия чужеродных генов и системы трансформации
Экспрессия чужеродных генов и системы трансформации
Что такое трансформация? Это введение ДНК неполовым путем в клетку реципиента, проводящее к наследуемому изменению генотипа Основной метод биотехнологии растений и мощнейшая экспериментальная методика Убирает барьеры по переноске генов Развитие трансформации E.coli, а также разрезание и сшивание ДНК in vitro дало начало генетической революции в 70-е годы Не надо путать с генетической трансдукцией, представляющей собой частный случай пепеноса генов между хозяином и вирусом Некоторые примеры: Секвенирование геномов четко показало, что у бактерий существует горизонтальный перенос генов между разными видами при определенных селектинвых преимуществах (условиях отбора) Формирование раковых клеток у животных под действием онкогенных вирусов, таких как SV40 и аденовирусов. Часть вирусной ДНК интегрируется в ДНК хозяина и вызывает неконтролируемый рост клеток (в биологии рака существует свое более узкое определение трансформации) 3. У растений, такких как бананы, табак и кокос tobacco, малые ДНК-вирусы (баднавирусы и нановирусы) интегрируются в виде множественных копий в ДНК хозяина при стрессе (вызывая потерю стрессоустойчивости). Это является существенной помехой программ селекции бабанов. Трансформация происходит в природе
Продолжить чтение
Полимеразная цепная реакция — ПЦР
Полимеразная цепная реакция — ПЦР
Что такое ПЦР? Методика для «усиления» (получения многочисленных копий) специфического участка двухцепочной ДНК. В ходе ПЦР-реакции образуются в больших количествах два амплимера – участка ДНК, заданного гена. При расплавлении ДНК два праймера прикрепляются к комплиментарным участкам темплейта. Термостабильная ДНК-полимераза из Thermus aquaticus (Taq-полимераза) синтезирует комплиментарные участки амплимера, начиная от праймера. Каждый цикл включает нагрев для денатурации ДНК и частичного охлаждение для возможности прикрепления праймеров к темплейту, с которого снимается копия. При частичном охлаждении также Taq-полимераза синтезирует копию гена или его заданного участка. Каждый цикл удваивает количество ДНК до цикла. Компоненты ПЦР  ДНК-темплейт, например, грубый клеточный экстракт, общая геномная ДНК, плазмидная ДНК и т.д. (нанограммы)  Два олигонуклеотидных праймера обычно 20 нуклеотидов (20-mer), (бывает 18-30!) (д.б. Одинаковой температуры плавления Tm of ~ 60°C)  dNTPs – деоксинуклеозид-трифосфаты (dATФ, dЦTФ, dГTФ, dTTФ)  ДНК-полимераза (и буффер) обычно Taq-ДНК-полимераза  ПЦР-буффер, обычно с Mg2+
Продолжить чтение