патогенные кокки 21

Грамположительные кокки
входят в 17 группу (Берги) и объединяют представителей 3 семейств:
Micrococcaceae,
Streptococcaceae,
Peptococcaceae.

Морфология стафилококков
Сферические клетки диаметром 0,5- 1,5 мкм. В мазках агаровых культур – неправильными скоплениями в виде грозди винограда.
Жгутиков не имеют, спор не образуют, хорошо окрашиваются анилиновыми красителями. Грам «+».

Классификация стафилококков
по наличию фермента плазмокоагулазы:
К коагулазоположительным относится S.aureus, S.intermedius;
К коагулазоотрицательным- S.epidermidis, S.saprophyticus, S.hominis, S.warnerii, S.auricularis и др.

Культивирование
Факультативные анаэробы, хорошо растут на универсальных питательных средах при рН 7,0-7,5; t 35-40 оС. Добавление к среде глюкозы и крови ускоряет рост. Способны расти на среде в присутствии 15% NaCl .

Факторы вирулентности стафилококков

Токсины

Патогенез инфекций
определяется действием одного или нескольких токсинов и ферментов, выделяемых стафилококками,
воротами инфекции
и иммунологической резистентностью организма.
Чаще стафилококовые инфекции развиваются при сниженной естественной резистентности.

Из иммунологических реакций применяют реакцию агглютинации латекса с латексными частицами нагруженными антителами.
При эпидемической необходимости проводят фаготипирование со стандартным набором из 23 бактериофагов

Специфическая терапия - специфическими иммуноглобулинами, сыворотками, бактериофагами, убитыми вакцинами.
Специфическая профилактика - анатоксином.
Этиотропная терапия проводится антибиотиками и нитрофурановыми препаратами.

Стрептококки
Впервые выделены в 1874 г. Х.Бильротом
Из 7 родов входящих в семейство наибольшее значение имеет роды: Streptococcus, Enterococcus.
Большое значение имеет носительство стрептококков.

Стрептококки
Морфология
Неподвижные сферические кокки размером 0,5-2,0 мкм.
В мазках они располагаются парами или короткими цепочками, при выращивании в жидких питательных средах.
При неблагоприятных воздействиях стрептококки способны образовывать L-формы.

Во многих странах мира отмечен рост заболеваемости стрептококковой инфекцией.
групповые случаи тяжелых генерализованных форм заболеваний (септицемия, некротический миозит, фасцит, первичный перитонит и др.)

По поверхностному группоспецифическому полисахаридному АГ клеточной стенки (С-АГ) стрептококки делят на серогруппы А,В,С, Д-Н и К-до V (20 серогрупп).
Дж. Шерман (1937) – комплексная фенотипическая схема дифференциации Str. на 4 группы: Pyogenic, Viridans, Lactic и Enterococci.
Р.Ленсфилд (1933) – деление гемолитических Str. по карбогидратному (капсульному) антигену

Группа Viridans (зеленящие): зеленящие, не устойчивые к высокой рН и NaCl, растущие при 10°C.
Группа Pyogenic (гнойные): β-гемолитические Str с групповыми антигенами A,B,C,E,F,G не растут при 10°C
Группа Lactic (молочные): отличаются от пиогенных способностью расти при 10°C, но не при 45°C, а от энтерококков – ингибицией роста 6,5% NaCl. Первоначально включала только молочно-кислые Str.
Группа Enterococci (фекальные): толерантные к высоким рН и концентрации NaCl, растущие в широком диапазоне t =10-45°C, иногда проявляющие β-гемолиз.
В настоящее время выделены в самостоятельный род.

Рост стрептококков на жидких средах

α (зеленящие Str) - непрозрачная зеленоватая зона неполного гемолиза
β (гемолитические Str) - прозрачная зона полного гемолиза
ƴ (негемолитические) – не вызывают изменений кровяного агара.

Обогатительный этап
Посев проб на обогатительные среды
бульон LIM/Тодд-Хевитта (сердечный настой, пептон, декстроза, хлорид, фосфат и карбонат натрия) c колистином/гентамицином и налидиксовой кислотой).
сывороточный бульон (гранулярный или хлопьевидный придонный рост).
кровяной бульон (аналогично + гемолиз).
Бульон Carrot и др. (18-24 ч; атмосфера 5-10% СО2)
Посев на плотные среды без предварительного обогащения дает ложноотрицательный результат почти в 50% случаев инфекции СГВ

Патогенез стрептококковых поражений
Адгезия микроорганизмов- Основные адгезины- липотейхоевые кислоты, фимбрии;
Наличие сенсибилизации, вызванной ранее перенесенной инфекцией;
Продукция токсинов и ферментов (более 20);
аутоиммунные механизмы:
- Перекрёстные АГ миокардиоцитов и белка М возбудителя
- депонирование иммунных комплексов (стрептококк-IgG) на мембране клубочка.

Факторы вирулентности стрептококков группы А

Биохимическая идентификация в микро-тест системах
СТРЕПТО-тест 16 и 24 (ЛаХема) – позволяют в течение 24 ч идентифицировать стрептококки по 12 и 24 биохимическим тестам, соответственно.
Возможен неавтоматический (визуальный) учет результатов.

Реакция латексагглютинации
Материал для анализа: выросшие на питательных средах колонии СГВ.Тестирование клинического материала: низкая чувствительность и специфичность
Идентификация СГБ экспресс-методами
Бесприборный иммунохроматографический тест (ИХТ)
Материал для анализа:
выросшие на питательных средах колонии СГВ
влагалищные мазки
Недостаток: отрицательные показания при низком титре СГВ в клиническом материале

Масс-спектрометрический анализ
позволяет идентифицировать возбудителя и дифференцировать его инвазивные штаммы от неинвазивных.
MALDI TOF (matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry)
SELDI (Surface-Enhanced Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry)

Лечение заболеваний, вызванных СГА
Инвазивные стрептококковые инфекции отличаются высокой скоротечностью процессов, и адекватная срочная антибиотикотерапия имеет первостепенное значение.

Специфическая профилактика
Ассоциированная вакцина – IRS 19 (Германия)- содержит лизаты 6 серотипов пневмококка, 5 серотипов стрептококков, сапрофитных нейссерий, стафилококков, клебсиелл, гемофильных палочек и моракселл.
Пневмо-23 поливалентная вакцина (Франция) для профилактики пневмококковых инфекций.

Грамотрицательные кокки

Морфология Neisseria meningitidis
Типичная для нейссерий может переходить в L-формы.
Поселяются в лейкоцитах и в мазке видны как бобовидные зерна внутри лейкоцита

Антигенная структура
родовые АГ (белки и полисахариды) общие для всех нейссерий,
видовые АГ(белковые),
группоспецифические (гликопротеидный комплекс)
типоспецифические- белки наружной мембраны (определяют серотип возбудителя).

По поверхностному полисахариду менингококки разделены на 12 серологических групп:
A, B, C, X,Y, Z, 29-E, 135-W, H, I, K, L.
Наибольшее значение в этиологии менингококковой инфекции имеют 3 серовара Neisseria meningitidis - А, В, С.

Требования к условиям культивирования
влажность не менее 70%
Температура 37 оС
потребность в СО2 в атмосфере.
высокая потребность в ростовых факторах, (добавки крови, сыворотки, асцитической жидкости)
рН 7,4-7,6.
Среды в чашках не могут храниться перед употреблением дольше 1—2 сут. перед посевом их подсушивают (и подогревают!) в термостате.

Культивирование
На плотной питательной среде через 18-20 часов образуются бесцветные, опалесцирующие, плоские, круглые колонии диаметром 0,5-1,5 мм. с ровным краем. На среде с кровью образуют колонии беловато-серые, больших размеров.
В бульоне дают равномерное помутнение, иногда нежную пленку на поверхности, в полужидких средах располагаются в верхнем слое.

N. meningitidis

Культуральные свойства

Факторы вирулентности
Neisseria meningitidis

Факторы вирулентности
Neisseria meningitidis

Менингококковая инфекция
Назофарингит, бессимптомное носительство
Менингит
Геморрагическая сыпь
Сепсис, септический шок
Легочная недостаточность
Некроз коры надпочечников
Менингококковое носительство
Менингококковый назофарингит
Менингит
Менингококцемия

Материал, направляемый в лабораторию, при гнойных менингитах
нативный ликвор (1мл);
ликвор (0,5 мл) в 5 мл полужидкого агара;
толстая капля крови;
кровь в обогатительной среде или 0,1% полужидком агаре (1:10)
кровь в количестве не менее 2 мл для индикации Аг и АТ

ТАМПОН ДЛЯ ВЗЯТИЯ НОСОГЛОТОЧНОЙ СЛИЗИ ПРИ ПОДОЗРЕНИИ НА МЕНИНГОКОККОВУЮ ИНФЕКЦИЮ

Исследование ликвора
Первая порция СМЖ (1 мл) –
общее ликворологическое
исследование Вторая порция СМЖ –
микробиологическое
исследование:
1 мл в стерильную пустую
пробирку
0,5 мл в 5 мл 0,1% полужидкого
агара
Материал немедленно доставляют в лабораторию
в теплом виде

Питательные среды для N.meningitidis по приказу № 375 от 23.12.1998
Транспортные среды Жидкие среды с линкомицином (5 мкг/мл) или ристомицином (20 ЕД/мл)
Полужидкая среда с ристомицином (20 ЕД/мл)
Среды для выделения нейссерий
Сывороточный агар
Сывороточный агар с ристомицином (20 ЕД/мл)
Сывороточный агар с линкомицином (5 мкг/мл)
Двухфазная питательная среда
Среды для идентификации
Желчно-сывороточный агар
Плотные среды с углеводами и сывороткой

Двухфазная питательная среда
Плотная часть
скошенный "шоколадный" агар на триптическом переваре
Жидкая часть
бульон на переваре Хоттингера
экстракт пекарских дрожжей
МР "Современные методические подходы к
микробиологической диагностике гемофильной
инфекции" , 1992, Приказ № 375 от 23.12.98
Первичный рост (помутнение) удается
выявить уже через 3-4 часа

Биохимическая активность
Выражена слабо.
Разлагают глюкозу, мальтозу с образованием кислоты без газа;
не разлагают лактозу, сахарозу, не образуют индола и сероводорода;
обладают оксидазной активностью, восстанавливают нитраты в нитриты, не разжижают желатину.

Экспресс-диагностика
При помощи коммерческих тест-систем обнаружение в СМЖ специфических антигенов менингококка
латекс-агглютинация,
ко-агглютинация,
иммуноферментный анализ

Цель постановки РНГА
а) как дополнительный метод диагностики менингококковой инфекции для обнаружения нарастания титра антител (диагностический титр 1/16, 1/32);
б) для ретроспективной диагностики локализованных форм в очагах заболевания;
в) для выявления серонегативных контингентов;
г) при оценке эффективности вакцинации.

Вакцины
Вакцина менингококковая группы А полисахаридная сухая;
Вакцина менингококковая групп А и С полисахаридная сухая;
Вакцина менингококковая А+С (Meningo A+C) - Пастер-Мерье
Вакцина менингококковая В+С
(Va-Meningoc - BC) - Куба

Специфическая терапия
Плацентарный иммуноглобулин.- защищает детей от возникновения генерализованных форм менингококковой инфекции.
Антименингококковая иммунная плазма (получена в Ленинграде в 1990 г.) При ее применении отмечается снижение летальности в 2,5 раза.

Гонококковая инфекция

Методы диагностики
Бактериоскопический метод;
Бактериологический метод;
Индикация антигенов;
Генная диагностика;
Серодиагностика

Диагностические критерии бактериоскопического метода
Обнаружение грамотрицательных диплококков, напоминающих по форме кофейное зерно;
При большом количестве диплококки располагаются в мазке во взаимно перпендикулярных плоскостях;
Внутриклеточное расположение диплококков.

Безасцитные среды

Отечественные среды промышленного производства
Питательная среда для выделения гонококка сухая фл. 100мл (НПО «Аллерген», Ставрополь)
Гонококковая среда (комплект: 100мл – основа; 24 мл – добавка) (НИВС, Красное Село)
ГНК –агар (ФГУП ГНЦ ПМ, Оболенск)

На сывороточном агаре образуют белесоватые колонии или крупные прозрачные колонии в виде капель росы диаметром 1-3 мм с ровным краем.

Верификация диагноза «Гонококковая инфекция локализованная. Острая; без осложнений» согласно приказу МЗ РФ №145
Микробиологическое исследование
Однократно - отделяемого из уретры
По потребностям :
влагалищного отделяемого;
глазных структур и жидкостей;
отделяемого из цервикального канала;
секрета больших парауретральных и вестибулярных желез;
отделяемого из ротоглотки;
секрета простаты;
мочи.
Микробиологическая диагностика гонореи проводится до лечения, затем через 2 и 14 дней после лечения (дальнейшие исследования по показаниям).
ПРОТОКОЛ ВЕДЕНИЯ БОЛЬНЫХ. ГОНОКОККОВАЯ ИНФЕКЦИЯ. Утвержден приказом МЗ РФ №145 от 20.08.03

Фарингит
Фарингит
Бленнорея новорожденных
Конъюктивит
Внегенитальные поражения

Этиотропное лечение антибактериальными препаратами.
Для лечения и диагностики хронических форм заболевания применяется убитая гонококковая вакцина(постановка провокационной пробы).
Специфической профилактики нет.