Shigelly_M

Этиологическая структура возбудителей ОКИ
Насчитывает до 500 нозологических форм
Патогенные и условно-патогенные представители семейства Enterobacteriaceae;
Вибрионы;
Кампилобактерии;
Аэромонады;
Клостридии;
Стафилококки;
Кишечные вирусы (ВГА, ВГЕ, рота-, энтеровирусы, вирусы полимиелита);
Патогенные простейшие (амебы, лямблии).

Семейство Enterobacteriaceae
включает более 40 родов согласно Определителю бактерий Берджи (2004)
Клинически значимые для человека:
патогенные роды Shigella, Salmonella, Esherichia, Yersinia, Klebsiella
Условно-патогенные: Enterobacter, Proteus, Providencia и др.

Характеристика семейства
Грам-отрицательные подвижные и неподвижные палочки, некоторые синтезируют капсулу, не образуют спор. Факультативные анаэробы, хорошо растут на обычных питательных средах при 37 ºС, обладают высокой ферментативной активностью по отношению к углеводам, спиртам, аминокислотам. Каталазоположительны (за искл. S. dysenteriae 1)

Ключевые биохимические тесты:

Род Shigella
Выделены Кастеллани и Чалмерс в 1919 г. Названы в честь Киёси Шига, описавшего типовой вид.
Различают 4 вида шигелл:
Подгруппа А – S. dysenteriae;
В – S. flexneri;
С – S. boidii;
D – S. sonnei.

Морфогическкие и культуральные свойства
Палочки с закругленными концами длиной до 2 – 3 мкм. Грам «-». Лишены жгутиков, неподвижны, не образуют спор и капсул. На поверхности клеток расположены реснички, обусловливающие адгезию к клеткам эпителия слизистой оболочки кишки. Факультативные анаэробы. Т° оптимум 37°С, рН 7,2.
Хорошо растут на обычных средах в виде гладкой, шероховатой и переходной форм.

Морфология шигелл и сальмонелл в мазках по Граму

При росте в бульоне гладкие S-формы образуют равномерное помутнение, шероховатые R-формы - придонный осадок, иногда пленку на поверхности среды.

Рост шигелл Флекснера в бульоне

На агаре шигеллы в S-форме образуют небольшие колонии до 1 – 1,5 мм в диаметре, круглые, слегка выпуклые с ровными краями, бесцветные блестящие полупрозрачные мягкой консистенции. Культуры могут быть одновременно в S-, R- и переходной формах.
S. flexneri и S. dysenteriae образуют более мелкие и нежные колонии.

Колонии S. flexneri на среде Плоскирева

Ш. Зонне образуют два типа колоний:
небольшие выпуклые колонии правильной округлой формы – 1-я фаза;
крупные плоские колонии с неровными краями, напоминающие виноградный лист – 2-я фаза.
Возможны промежуточные формы.

Шигеллы не растут на ВСА

Рост шигелл в 0,3% ПЖА

Биохимические свойства
Шигеллы биохимически мало активны.
Разлагают глюкозу до кислоты без газа, маннит (кроме S. dysenteriae), дают положительную реакцию с метиловым красным; индол образуют вариабельно.
Не продуцируют сероводород на среде Клиглера, не ферментируют лактозу (кроме шигелл Зонне-замедленно), сахарозу, желатин, адонит и инозит, не гидролизуют мочевину, малонат натрия, цитрат в среде Симмонса, не ферментируют фенилаланин и лизин.

Рост шигелл на среде Клиглера

Антигенное строение
Имеют 2 О-Аг (типовой и групповой) – термостабильны, по строению - ЛПС-белковый комплекс; белок обусловливает иммуногенность, ЛПС – серологическую специфичность.
К-Аг – поверхностный, термолабильный. Способен маскировать агглютинацию шигелл О-сыворотками. Разрушается при кипячении культуры при 100° С в течение часа.
Серологическая идентификация шигелл проводится при использовании О - антисывороток.

Схема серологической идентификации шигелл
1. Ставится ОРА (слайд-агглютинация) с поливалентной антисывороткой к S. flexneri – S. sonnei. В «+» случае развертывается ОРА с каждой сывороткой в отдельности (с поливалентной сывороткой к S. flexneri и с сывороткой к S. sonnei).
При наличии агглютинации культуры с поливалентной сывороткой к S. flexneri ставится РА с типовыми сыворотками к S. flexneri (с I по YI) – определяют серовар и затем с групповыми (3,4; 6; 7,8) – подсеровар.

В случае отрицательного результата с поливалентной сывороткой к S. flexneri ставится ОРА с сывороткой к S. Sonnei к I и II-й фазам.
2. Маннит «+» штаммы шигелл, не агглютинирующиеся поливал. сывороткой к S. flexneri – S. sonnei испытывают с поливалентной сывороткой к S. boidii; при «+» ОРА проводится расшифровка с моносыворотками к S. boidii (1-15).

3. Маннит «-» штаммы шигелл агглютинируют с поливалентной сывороткой к S. dysenteriae, при наличии агглютинации реакцию развертывают с моновалентными сыворотками к S. dysenteriae (1 – 16).

Серологические методы диагностики:
РНГА
Экспресс-методы - выявление Аг шигелл в испражнениях:
РКОА, РЛА, РНГА, ИФА

Факторы патогенности
Шигеллы способны к инвазии в клетки эпителия слизистой оболочки тонкой кишки, к переходу в соседние клетки, внедрению в цитоплазму нейтрофилов и макрофагов.
S. dysenteriae 1 продуцируют экзотоксин (токсин Шига) – вызывает гибель клеток эпителия кишечника и приток жидкости в очаг поражения, нарушает синтез белка, всасывание натрия и воды.
Эндотоксин – воздействует на сосудистую и нервные системы организма, образуя геморрагии и тромбозы, понижает АД, нарушает активность макрофагов.

Чувствительность к АБ
Препараты выбора – ампициллин, ко-тримоксазол, ципрофлоксацин и др. с учетом чувствительности к АБ шигелл.
Наиболее часто шигеллы устойчивы к тетрациклинам, левомицетину, стрептомицину.
При терапии дизентерии назначают эубиотики: бифидумбактерин, бификол, колибактерин, лактобактерин. Полезно определение формы и степени дисбактериоза по соотношению микробов естественной флоры кишечника.
Назначаются симптоматические средства и восполняются потери жидкости и электролитов.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИОХИМИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПОЛУАВТОМАТИЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ АРI (АРI 20Е)

ЭТАПЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ПРИ ОКЗ
1 ДЕНЬ
Подготовка материала к исследованию;
Бактериоскопия исследуемого материала (при анализе материала из стерильных полостей и гноя);
Посев в среды обогащения:
кровь, желчь, спинномозговой ликвор («чистый» материал)– в желчный бульон, среду Рапопорт, двойную среду

-материал, контаминированный посторонней микрофлорой – в селенитовый бульон, среды магниевую, Килиана, Кауфмана.
-Посев на плотные элективные и селективные среды – Эндо, Левина, Плоскирева, ВСА.
Инкубация при 37 °С 24 часа, на ВСА – 48 часов.

2-Й ДЕНЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Просмотр посевов нативного материала на плотных и жидких средах;
Отбор подозрительных лактозо »-» колоний, приготовление мазков по Граму, просмотр;
Пересев культур из них на ПУС для изучения биохимической активности, сектора среды Эндо или косяки МПА для накопления чистой культуры;

Высев из сред обогащения на плотные среды, приготовление мазка с окраской по Граму;
Изучение подвижности выделенной культуры методом висячей или раздавленной капли или посевом в 0,3% питательный агар рН 7,4;
Посев в питательный бульон рН 7,4 + индикаторные полоски для выявления индола и сероводорода;
Посев в среду Симмонса;
Постановка ОРА с диагностической поливалентной эшерихиозной сывороткой ОКА.
Реакция начинается с контроля культуры (эмульгирования исследуемой культуры в физиолог. растворе) для исключения спонтанной РА.

3-Й ДЕНЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Первичное изучение биохимической активности выделенной культуры на ПУС, определение подвижности (учет тестов);
Изучение АГ-го строения выделенной культуры с использованием диагностических поливалентных и монорецепторных сывороток к шигеллам, сальмонеллам, ЭПКП в ОРА;
Подбор необходимого набора биохимических тестов для определения вида возбудителя и посев на дифференциально-диагностические среды.
Постановка пробы на чувствительность к АБ-м методом дисков.