Способы взятия крови у рыб. Взятие крови у рыб. Тема 2. Лабораторная работа № 2

Оборудование и реактивы:
- шприц с инъекционными иглами - стерильные,
- пастеровские пипетки - стерильные,
- часовое стекло,
- 5% раствор натрия цитрата или 0,2% раствор гепарина (1.000 ЕД/мл),
- анестетики,
- спирт,
- марля, вата.

Кровь берут у голодной рыбы, выдержанной в хорошо аэрированной воде в течение 5 - 10 минут после отлова. Если это невозможно, то пойманную рыбу следует сразу помещать в ведро с водой из водоема в соотношении 1:10, содержащей релаксирующую концентрацию одного из анестетиков:
пропаксат (0,6 - 0,8 мг/л), хиналдин (25 - 30 мг/л), серный эфир (1 - 1,5%) и др. Вода, в которой находится анестезированная рыба, должна постоянно аэрироваться.
В зависимости от размера объекта и необходимого количества крови кровь берут несколькими способами: из сердца, жаберной вены, хвостовой артерии, отсечением хвоста.

Место пункции после снятия чешуи обрабатывают 70° спиртом и высушивают ватным тампоном для удаления слизи. Для взятия крови чаще используют шприц с инъекционной иглой либо пастеровскую пипетку. Инструменты предварительно обрабатывают водным раствором антикоагулянтов: цитрата натрия или гепарина. Место взятия крови нельзя сжимать во избежание попадания тканевой жидкости, искажающей результаты. Повторно брать кровь из одного и того же места не рекомендуется.
Анализируемая кровь должна быть свежей, жидкой. Во избежание разрушения эритроцитов (гемолиза) кровь берут в подготовленные пробирки (или часовое стекло), сливая осторожно по стенке.

Приготовление и окраска мазков крови
1. Подготовка предметных стекол:
- один конец стекла размером в 1 - 1,5 см шлифуют на наждаке для надписи простым карандашом,
- стекла кипятят в 1%-ном растворе двууглекислой соды - 10 мин.,
- охлаждают и промывают водопроводной, а затем дистиллированной водой - 5 мин.,
- стекла помещают в слегка подкисленный соляной кислотой раствор дистиллированной воды на 2- 3 мин.; затем дважды промывают дистиллированной водой, высушивают на воздухе или в сушильном шкафу и хранят в смеси спирта с эфиром 1:1. Перед употреблением их вынимают, насухо вытирают чистой салфеткой или фильтровальной бумагой. Они готовы к использованию.

2. Приготовление рабочего раствора краски азур-эозина:
5,5 мл концентрированной краски азур-эозина помещают в 250 мл нейтральной дистиллированной воды и тщательно перемешивают.

3. Ход работы
Кровь после взятия (см. п. 2) наносят в виде небольшой капли на заранее приготовленное обезжиренное предметное стекло на расстоянии 1,5 - 2 см от его шлифованного края.
Большим и указательным пальцами правой руки берут шлифованное стекло за боковые ребра, ставят на предметное стекло под углом 45° и подвигают тыльной стороной к капле, которая от соприкосновения растекается. Скользящим движением продвигают шлифованное стекло вперед.
Кровь должна равномерно распределяться по предметному стеклу в виде мазка. От каждой рыбы готовят не менее двух мазков. После приготовления мазка его высушивают на воздухе в течение 10 - 15 минут.