Холерные вибрионы. Неферментеры

Возбудитель холеры
Vibrio cholerae

Холера – острая особо опасная карантинная инфекция, характеризующаяся поражением тонкой кишки, нарушением водно-солевого обмена и интоксикацией
Возбудителями холеры являются представители вида
Vibrio cholerae серогрупп О1 и О139
Холера – острая особо опасная карантинная инфекция, характеризующаяся поражением тонкой кишки, нарушением водно-солевого обмена и интоксикацией
Возбудителями холеры являются представители вида
Vibrio cholerae серогрупп О1 и О139

Возбудитель холеры
семейство Vibrionaceae
род Vibrio
вид Vibrio cholerae
Внутри вида различают 2 биовара
V.cholerae classic и V.cholerae El Tor

Морфология
К виду V. сholerae относят грамотрицательные, аспорогенные, полиморфные, слегка изогнутые
или прямые палочки длиной 1.5-3.0 мкм
и шириной 0.2-0.6 мкм, с одним полярно расположенным жгутиком, который длиннее тела клетки в 2-3 раза.
Не образует споры и капсулу.

Подвижность холерных вибрионов
Холерные вибрионы имеют один полярно расположенный жгутик.

Культуральные свойства
Холерные вибрионы являются факультативными анаэробами, Оптимальные показатели температуры среды для культивирования – 35-37ºС,
рН среды 8.5-9.0
хорошо растут на питательных средах в присутствии 0.5-2.0% хлорида натрия.

Культуральные свойства
на жидких питательных средах - помутнение с образованием тонкой серовато-голубоватой пленки на поверхности.
на плотных питательных средах - мелкие, круглые, с ровными краями, полупрозрачные S-колонии, маслянистые, голубоватые.

На щелочном агаре в типичной S-форме - гладкие, почти прозрачные колонии, имеющие голубоватый отлив; через 10-12 часов размер – 1-1,5 мм, через 18-24 часа – 2-3 мм.

V.cholerae

Посев нативного материала

На элективной среде TCBS колонии вибрионов круглые, гладкие с ровным краем, плоские, желтого цвета.

Биохимические свойства
Оксидазопозитивные
Ферментируют глюкозу, сахарозу, маннозу, маннит, крахмал
Не активны по отношению к лактозе, арабинозе, инозиту, дульциту
Не продуцируют сероводород, образуют индол
Синтезируют ферменты декарбоксилазы лизина и орнитина, но не продуцируют дигидролазу аргинина
Обладают протеолитическими свойствами (разжижают желатин) и нитратредуктазной активностью

Биовары холерных вибрионов
Различаются
по чувствительности к бактериофагам классическому и эльтор
По способности агглютинировать куриные эритроциты
По чувствительности к полимсиксину В
По продукции ацетилметилкарбинола (реакция Фогес-Проскауэра)

Биовар Эльтор лизируется бактериофагом эльтор, не чувствителен к полимиксину В, агглютинирует эритроциты курицы и синтезирует ацетилметилкарбинол.
Биовар классический чувствителен к своему бактериофагу, не растет на агаре с полимиксином, не склеивает куриные эритроциты и не продуцирует ацетилметилкарбинол (реакция ФП отрицательная)

Лизабельность холерных вибрионов диагностическими монофагами
(классическим и эльтор)

Определение чувствительности к полимиксину

РЕАКЦИЯ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ С КУРИНЫМИ ЭРИТРОЦИТАМИ

Антигенная структура:
Холерные вибрионы имеют два комплекса антигенов:
Н-антиген (жгутиковый, термолабильный, имеет белковую природу) - неспецифичен, общий для всех серогрупп вибрионов
О-антиген (соматический, термостабильный, имеет липополисахаридную природу) – высоко специфичен.
Холерные вибрионы разделяются по О-антигену на серологические группы (в настоящее время их более 200). Холеру вызывают холерные вибрионы О1 и О139 серогрупп.
Холерные вибрионы других серогрупп (О2, О3, О4, О22 и др.) способны вызывать локальные вспышки энтеритов и гастроэнтеритов, не склонных к эпидемическому распространению.

Внутри О1 серогруппы холерных вибрионов в зависимости от сочетания А-, В- и С- компонентов выделяют серовары V.cholerae:
Огава (А, В)
Инаба (А, С)
Гикошима (А, В, С)
Вибрионы серогруппы О139 агглютинируются только сывороткой О 139
Вибрионы, не агглютинирующиеся О1 и О139-сывороткой, называют неагглютинирующимися (НАГ-вибрионами)

Факторы патогенности:
Холероген (экзотоксин, энтеротоксин)
токсинкорегулируемые пили адгезии
нейраминидаза
гемагглютининпротеаза
муциназа
эндотоксин

Механизм действия холерного токсина

Патогенез V.cholerae
слизистая тонкого кишечника
адгезия, колонизация
(за счет пилей, муциназы)
выделение холерогена
диарея, рвота

Источник инфекции – больной человек и вибриононоситель, вода, гидробионты
Возбудитель холеры, особенно биовар
Эль-Тор способен к существованию в воде в симбиозе с гидробионтами, водорослями, в неблагоприятных условиях может переходить в некультивируемую форму.

Пути передачи холеры:
- водный
- пищевой
- контактно-бытовой

Клиника:
Инкубационный период –от 2 часов до 6 дней
Клинически: острое начало, подъем температуры, боли в животе, тенезмы, рвота, диарея, выделение в сутки до 30 литров жидкости, стул носит характер «рисового отвара», резкое обезвоживание приводит к нарушениям со стороны деятельности сердечно-сосудистой и дыхательной систем, развитию почечной недостаточности, холерному алгиду и смерти.

Иммунитет:
непрочный, непродолжительный клеточно-гуморальный.

Устойчивость холерных вибрионов во внешней среде
чувствительны к УФ, высушиванию, дезинфектантам (за исключением четвертичных аминов), кислым значениям рН, нагреванию.
В пищевых продуктах выживают от нескольких часов до 30 дней.
В воде открытых водоемов в весенне-летний период – до 5 месяцев.
В морской воде – до 3 месяцев.
В сточной воде – до 3 недель.
В испражнениях – до 50 дней.

Материал для исследования
испражнения, рвотные массы, желчь, объекты окружающей среды (вода, пищевые продукты, белье, сточные воды, смывы с объектов окружающей среды и др.)

Микробиологическая диагностика холеры
Материал засевают в накопительные щелочные среды рН 8,0 (1% пептонная вода и щелочной агар), используют дифференциально-диагностическую элективную среду TCBS, далее выделенную культуру исследуют путем посевов в набор сред для идентификации, изучают антигенные и биохимические свойства

В практике лабораторной диагностики холеры широко используют экспресс методы:
РИВ, РИФ и ПЦР

Метод флюоресцирующих антител (МФА) или реакция иммунофлюоресценции (РИФ)
Мазок из испражнений больного
Чистая культура V. cholerae O1

Лечение
Проводят патогенетическую терапию, направленную на нормализацию водно-солевого обмена и этиотропную антибиотикотерапию (хлорамфиникол, фторхинолоны, доксициклин, амоксициллин)

ЛИЗАБЕЛЬНОСТЬ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ ФАГАМИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭПИДЕМИЧЕСКОЙ ЗНАЧИМОСТИ

Профилактика холеры направлена на выполнение санитарно-гигиенических требований и проведение карантинных мероприятий

Специфическая профилактика:
Имеет вспомогательное значение
применяют 2 препарата:
-корпускулярная убитая вакцина
комплексный препарат, состоящий из холероген-анатоксина (70%) и О-антигенов (30%) сероваров Огава и Инаба
Данные вакцины используются для введения лицам, выезжающих в страны с напряженной эпидемиологической ситуацией по холере

Pseudomonas aeruginosa (синегнойная палочка)
Псевдомонады относятся к семейству Pseudomonadaceae.
Типовой вид рода Pseudomonas —
P. аeruginosa
(синегнойная палочка — возбудитель многих гнойно-воспалительных заболеваний).

Морфологические и тинкториальные свойства
Грамотрицательные прямые палочки размером от 1 до 5 мкм, расположены одиночно, попарно или в виде коротких цепочек.
Подвижны за счет наличия одного, редко двух полярно расположенных жгутиков.
Спор не образуют, имеют пили (фимбрии).
Продуцируют капсулоподобную внеклеточную слизь полисахаридной природы.

Культуральные свойства
облигатные аэробы
хорошо растут на простых питательных средах, применяют селективные или дифференциально-диагностические питательные среды с добавлением антисептиков — малахитовый агар с добавлением бриллиантового зеленого или ЦПХ-агар с ацетамидом.
Оптимальная температура роста 37 °С,
способна расти при 42 °С, что позволяет отличать ее от других псевдомонад.

На поверхности жидкой питательной среды - характерная серовато-серебристая пленка, а на плотной среде - гладкие округлые суховатые колонии или слизистые колонии с металлическим отливом, среда вокруг колонии зеленеет.
На кровяном агаре вокруг колоний синегнойной палочки наблюдаются зоны полного гемолиза.

Pseudomonas

P. aeruginosa продуцирует триметиламин, придающий культурам этих бактерий своеобразный сладковатый запах жасмина, земляничного мыла или карамели.
синтезирует водорастворимые пигменты, окрашивающие повязки больных или питательные среды при их культивировании. Чаще всего они - феназиновый пигмент — пиоцианин сине-зеленого цвета, но могут образовывать и зеленый, и красный, черный или желтый пигменты.

Биохимические свойства
продуцирует каталазу и цитохромоксидазу (псевдомонады оксидазопозитивны)
обладает низкой сахаролитической активностью: не ферментирует углеводы, однако для получения энергии способна их окислять. Для дифференциальной диагностики применяют OF-тест (тест окисления-ферментации глюкозы) на среде Хью–Лейфсона.
P. aeruginosa восстанавливает нитраты в нитриты, обладает протеолитической активностью: разжижает желатин, гидролизует казеин.

Ферментация глюкозы в среде
Хью - Лейфсона (Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas, Pseudomonas)

Антигенные свойства
Синегнойная палочка имеет О- и Н-антигены:
ЛПС клеточной стенки является типо- или группоспецифическим термостабильным О-антигеном
Термолабильный жгутиковый Н-антиген
На поверхности клеток синегнойной палочки обнаружены также антигены пилей (фимбрий).
Кроме того, P. aeruginosa продуцирует целый ряд внеклеточных продуктов, обладающих антигенными свойствами: экзотоксин А, протеаза, эластаза, внеклеточную слизь, которые вместе с тем являются и ее факторами патогенности.

Факторы патогенности
Адгезивные свойства P. aeruginosa определяются наличием пилей (фимбрий) на поверхности их клеток.
Гликолипопротеид, входящий в состав внеклеточной слизи P. aeruginosa

Токсины
ЛПС - эндотоксин
Экзотоксин А— цитотоксин
Экзоэнзим S (экзотоксин S).
Лейкоцидин
Энтеротоксин и факторы проницаемости

Ферменты агрессии.
Нейраминидаза
гемолизины: фосфолипаза С и гликолипид
Протеазы и эластаза
экзотоксин А

Резистентность.
хорошо сохраняется в пресной, морской и даже дистиллированной воде.
В водопроводной воде P. aeruginosa живет и размножается более 2,5 мес.
сохраняют жизнеспособность даже в растворах антисептиков и дезинфектантов
В то же время P. aeruginosa чувствительна к высушиванию, действию хлорсодержащих дезинфицирующих препаратов. Она легко инактивируется при воздействии высоких температур (при кипячении, автоклавировании).
высокая устойчивость P. aeruginosa к антибиотикам объясняется способностью синтезировать бета-лактамазы.

Экология псевдомонад.
Среда обитания псевдомонад - почва и различные пресные и соленые водоемы.
Около 5–10% здоровых людей являются носителями различных штаммов P. aeruginosa (они в норме колонизируют кишечник) и около 70% пациентов, находящихся в стационаре.
В клинике псевдомонады могут встречаться повсеместно, образуя биопленки: в водопроводных и вентиляционных системах, на фруктах и овощах, комнатных растениях, на поверхности мыла, щетках для мытья рук, полотенцах, в дыхательных аппаратах и т.д.

Эпидемиология
Заболевание может развиться в результате аутоинфицирования (эндогенное заражение) или экзогенно.
Источником инфекции являются люди (больные или бактерионосители), а также естественные резервуары природы. Поэтому синегнойную инфекцию можно считать сапроантропонозом.
Механизмы и пути заражения: контактный, респираторный, кровяной или фекально-оральный.
Синегнойная палочка является возбудителем внутрибольничных (госпитальных) инфекций, т.е. заболеваний, возникающих у людей, находящихся на лечении в стационаре (артифициальный путь заражения при ИСМП)

Патогенез
Синегнойная палочка проникает в организм человека через поврежденные ткани. Прикрепляясь, бактерии заселяют раневую или ожоговую поверхность, слизистые оболочки или кожу и размножаются.
Локальный процесс (инфекция мочевыводящих путей, кожи, респираторного тракта) может генерализоваться. Бактериемия -- диссеминация возбудителя – развитие сепсиса -- формирование вторичных гнойных очагов
Развитие синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания, шок, а также респираторного дистресс-синдрома.

Клиника
Вызывает гнойно-воспалительные заболевания различной локализации: раневые инфекции, ожоговую болезнь, менингит, инфекции мочевыводящих путей, кожи, заболевания глаз (кератит), некротическую пневмонию, сепсис.
Она является возбудителем злокачественного наружного отита у диабетиков.
Смертность от синегнойного сепсиса составляет около 50%.

Иммунитет
В сыворотке крови обнаруживают антитоксические и антибактериальные антитела,
однако их роль в защите от повторных заболеваний мало изучена.

Микробиологическая диагностика
Материал для исследования:
кровь (при септицемии),
спинномозговая жидкость (при менингите), гной и раневое отделяемое (при инфицированных ранах и ожоговых поражениях),
моча (при инфекциях мочевыводящих путей),
мокрота (при муковисцидозе и инфекциях респираторного тракта)

Бактериоскопия мазков из исследуемого материала малоинформативна из-за отсутствия у синегнойной палочки морфологических и тинкториальных особенностей.

Основной метод диагностики — бактериологическое исследование
При идентификации P. aeruginosa учитывают: - рост на ЦПХ-агаре,
- пигментообразование,
- наличие специфического запаха
- положительный цитохромоксидазный тест,
- выявление термофильности (рост при 42°С)
- способность окислять глюкозу в ОF-тесте.

Серологический метод
обнаружение специфических антител к антигенам синегнойной палочки:
- РСК, РПГА
- опсонофагоцитарная реакция
Разработана также ПЦР-диагностика для идентификации возбудителя.

Лечение
Антибиотики, причем рекомендуют использование комбинации препаратов из разных групп.
Антимикробная терапия назначается только после получения результатов антибиотикограммы. При ургентных инфекциях (неотложные ситуации) антибиотики назначаются эмпирически. Препаратами выбора являются цефалоспорины и другие бета-лактамные препараты, аминогликозиды, а также азтреонам и ципрофлоксацин.
Для лечения тяжелых форм - гипериммунная плазма
При местном лечении инфекций кожи - антисинегнойный гетерологичный иммуноглобулин
Синегнойный бактериофаг (бактериофаг пиоцианеус) или поливалентный жидкий пиобактериофаг.

Профилактика
Эффективная стерилизация, дезинфекция и антисептика, а также соблюдение правил асептики в стационаре.
Следует контролировать обсемененность объектов окружающей среды и соблюдать правила личной гигиены.

Специфическая профилактика
В нашей стране применяются:
поливалентная корпускулярная синегнойная вакцина (из 7 штаммов P. aeruginosa)
стафило-протейно-синегнойная вакцина.

Моракселлы
Род Moraxella относится к семейству Moraxellaceae.
Типовым видом является Moraxella lacunata.

Моракселлы — грамотрицательные палочки или кокки мелкие полиморфные, расположенные попарно (соприкасающиеся стороны уплощены) или в виде коротких цепочек.
Бактерии неподвижны, образуют капсулу, в наличии фимбрии

Культуральные свойства
Моракселлы — аэробы. Оптимальная температура роста 33–35 °С.
Бактерии требовательны к составу питательных сред, нуждаются в добавлении аминокислот, биотина, лактата в качестве источника углерода и энергии.

Культуральные свойства
На плотных питательных средах они могут образовывать два типа колоний:
шероховатые с неровными краями
очень мелкие гладкие с ровными краями

Биохимические свойства
Моракселлы относятся к неферментирующим бактериям, поэтому при утилизации углеводов кислотообразование не наблюдается.
Могут восстанавливать нитраты
Имеют каталазу и оксидазу

Патогенность
Эндотоксин
Фимбрии
ДНК-аза

Резистентность
Моракселлы малоустойчивы в окружающей среде.

Эпидемиология и клиника
В норме обнаруживаются на слизистых оболочках верхних дыхательных путей человека и животных.
Однако способны вызывать заболевания у людей со сниженной иммунологической реактивностью:
- эндокардит, конъюнктивит, менингит, уретрит и респираторные инфекции (бронхит, пневмонию, фарингит, отит, синусит).

Микробиологическая диагностика основана на бактериологическом исследовании материала, взятого от больных.
M. catarrhalis продуцирует бутиратэстеразу, обнаружение которой используется при экспресс-диагностике

Лечение
β-лактамные антибиотики
рекомендуется применять антибиотики других групп

Профилактика
разработана лечебная вакцина (бронхомунал, бронховакс), содержащая лизаты восьми видов микроорганизмов, в том числе M. catarrhalis.

Ацинетобактер
род Acinetobacter
Бактерии рода Acinetobacter вызывают госпитальные инфекции. Наибольшее медицинское значение имеют A. baumannii, A. lwoffii, A. Haemolyticus
типовой вид A. calcoaceticus.

Морфология и тинкториальные свойства
Грамотрицательные короткие толстые полиморфные палочки длиной 1,5–2,5 мкм; часто имеют кокковидную или овоидную форму.
В мазке располагаются беспорядочно, или в виде коротких цепочек.
Спор не образуют.
Наличие фимбрий
Жгутиков не имеют
Могут образовывать капсулу.

Культуральные свойства.
Ацинетобактерии — строгие аэробы.
Они хорошо растут на обычных питательных средах, при температуре 30–35 °С и рН 7.
На плотных средах образуют мелкие блестящие колонии. При росте на кровяном агаре возможно образование зоны гемолиза.

Биохимические свойства
Биохимические свойства ацинетобактерий выражены слабо.
Полисахариды не разлагают
Индол и сероводород не образуют
лизин не декарбоксилируют

Факторы патогенности
ЛПС клеточной стенки
капсула, препятствующая фагоцитозу
адгезины, обеспечивающие прикрепление микроба к эпителию.

Эпидемиология и клиника
Ацинетобактерии широко распространены в природе. Обитают в почве, воде. Часто обнаруживаются на коже и на слизистой носоглотки здоровых людей.
Вызывают госпитальные инфекции (второе место после псевдомонад), сепсис, перитониты, эндокардиты, раневую и ожоговую инфекции
Выделяются при поражении кожных покровов и слизистых оболочек респираторного и урогенитального трактов.

Микробиологическая диагностика
Материал для исследования — кровь, гной, раневое отделяемое.
Выделяют чистую культуру, идентификация проводится по биохимичесим свойствам.

Лечение
Микроб чувствителен к неомицину и полимиксину.

Специфическая профилактика
не разработана